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骨缺损的修复几个世纪以来一直是外科工作者不断研究的重要课题。自体骨移植虽然得到普遍认同,但大面积的骨缺损无法取得足够的自体骨,而同种异体骨移植材料和自体骨较为相近,具有人骨的三维孔隙结构、更好的材料学和生物学特性,并在骨传导和骨诱导能力上更强,具有很好的应用前景。但是目前所用的同种异体骨移植材料都是取自新鲜人骨组织进行处理,材料的来源主要是死亡的尸体、意外截除的肢体,来源相对较少。且死亡后的尸体不可避免带有一定病菌,不能保证骨组织的质量。如何能解决同种异体骨移植材料的来源问题呢?本研究以福尔马林固定后的骨组织为原料,进行处理去除固定剂后制备成可用于骨缺损修复的同种异体骨移植材料,并对其理化性质、细胞毒性和组织相容性进行检测。 [目的] 1、将福尔马林固定源骨组织制备成可用于骨缺损修复的同种异体骨移植材料,并对材料残余福尔马林含量进行检测; 2、探讨该种骨移植材料在材料学和生物学方面作为移植材料的可行性。 [方法] 1、用氧化酶解的方法对10%福尔马林固定超过六月的骨组织进行处理制备成骨移植材料,并用水萃取法对材料残余福尔马林含量进行检测; 2、从材料孔径、孔隙率、初始Ph值、蛋白质含量、钙磷含量、钙磷比值、脂肪含量和材料降解产物Ph值变化等方面对材料进行检测; 3、取制备好的骨移植材料10g,以50ml DMEM培养基作为浸提介质制备成材料浸提液,以浸提液培养大鼠L6细胞系,通过倒置相差显微甲璐固定源同种导体矛移植材料钊备和移植的实脸研究镜、四哇盐(MTT)法和流式细胞仪等方法,观察材料对细胞生长、增殖和代谢的影响;另取材料109直接同L6细胞复合培养,用倒置显微镜和扫描电镜观察细胞形态; 4、将制备的甲醛固定源骨移植材料植入大鼠皮下和肌肉内;另建立兔挠骨缺损模型,并植入该种骨移植材料,柯氏针固定,通过组织学和影像学观察等方法评价材料组织相容性。 【结果】 1、该种骨移植材料在外观,色泽和形态上与成品的骨移植材料没有明显差别。其残余的福尔马林含量远低于现有标准和规程对甲醛生物摄入量的要求; 2、材料在各个理化性质检测指标和成品骨移植材料没有明显差别,而在蛋白质、脂肪含量和降解产物Ph值变化等方面更加优于成品骨移植材料: 3、该种材料及其浸提液和细胞复合培养后,细胞形态正常,生长良好,各项指标均表示该种材料对细胞增殖、分化和细胞周期无影响; 4、材料植入后动物一般情况良好,运动和进食不受影响。皮下和肌肉内植入试验发现,材料能引导软组织长入孔隙内,植入区周围组织无不良反应,并有异位成骨趋势;而原位骨缺损修复实验中,材料能促进形成软骨或类骨组织,最后钙化形成新骨以修复骨缺损。 【结论】 1、经过制备得到的同种异体骨移植材料基本不含甲醛,植材料的来源问题,减少了材料含病原体的可能性; 2、该种骨移植材料有较为理想的材料学和生物学特性,研究最终用于骨缺损修复的价值。并解决了移具有进一步