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本实验对蓝白花肉牛皮肤成纤维细胞的分离、体外培养方法，及去分化进行了研究，对成纤维细胞的一些生长特性作了讨论，并在血清饥饿和冷冻保存方面作了探讨。研究结果表明： 1．组织块培养和消化分离单细胞均能获得良好的蓝白花肉牛皮肤原代培养物，体外培养的成纤维细胞比上皮细胞对胰酶更敏感，据此可将二者分离纯化。混合培养物用0.25％胰酶+0.02％EDTA消化5min所收集到的细胞主要为成纤维细胞，经过2～3次传代，可得纯化的成纤维细胞系。 2．0.25％胰酶37℃下消化组织块2h，可得到较为理想的细胞数量用于接种。该时间是胰酶消化蓝白花肉牛皮肤组织的合适时间。 3．以含血清和双抗的RPMI1640为基础培养液，分别添加FGF，Insulin，以细胞群体倍增殖为指标，评估活性因子对成纤维细胞的影响。结果表明：Insulin对细胞生长有明显促进作用，而添加FGF与不添加的影响无显著差异。 4．用不含血清和含0.5％血清的培养液直接饥饿指数生长期的成纤维细胞，细胞数量先是略有增长，然后逐渐下降。梯度饥饿时在依次更换含4％、2％、1％血清的培养液后，细胞仍缓慢增长；在换为含0.5％血清的培养液后，细胞数量开始平缓下降。 5．用添加血清和双抗的RPMI1640为基础培养液，分别添加10％甘油，10％乙二醇，10％DMSO冻存蓝白花肉牛皮肤成纤维细胞。解冻后36h细胞贴壁率分别为70.49％、80.85％、86.53％。添加DMSO的冻存液效果最佳，可以满足其细胞传代和长期保存的需要。 6．将第5代的蓝白花肉牛皮肤成纤维细胞以0.3、0.6、0.9、1.2℃/min的降温速率用胚胎冷冻法进行超低温冷冻保存，解冻后细胞贴壁率76.8％～88.6％，并证明平衡时间以2h为宜。 7．胚胎冷冻法适用于成年体细胞冷冻保存。