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环氧合酶（cyclooxygenase，COX）是花生四烯酸合成前列腺素的限速酶，分为COX-1和COX-2，在慢性炎症中，COX-2活性增加。近来发现许多消化系统肿瘤有COX-2的过度表达，COX-2抑制剂具有抗肿瘤的作用。大多数胰腺癌在诊断时已属进展期，无法手术切除，化疗药对患者毒副作用大，疗效不佳。正常胰腺组织没有COX-2的表达，胰腺癌中有COX-2的表达，为此我们探讨了COX-2抑制剂对胰腺癌生长的抑制作用及其机制。长期饮酒被认为是胰腺癌的高危因素。关于酒精对胰腺的致病研究主要集中在急、慢性炎症上。除了这些，长期酒精摄入对胰腺还可能带来哪些损伤？这些损伤与胰腺癌有何关联？在本研究的预实验中，我们观察到长期酒精摄入并未引起大鼠慢性胰腺炎，但胰腺腺泡细胞呈现退行性病变，胰腺外分泌功能降低。胰腺腺泡细胞损伤时，作为炎症指标之一的COX-2有无改变目前尚不清楚，COX-2抑制剂对胰腺腺泡细胞结构和功能的影响更是未见报道。目的：1. 探讨不同选择性COX-2抑制剂对胰腺癌细胞株生长的抑制作用有无差异？<WP=8>2. 高选择性COX-2抑制剂-罗非昔布能否抑制胰腺癌生长及其机制。3. 酒精对大鼠胰腺腺泡细胞结构和功能的影响及COX-2表达的改变。4. 蛋白质摄入量对大鼠酒精性腺泡细胞退行性病变及COX-2表达的影响。5. 罗非昔布对酒精性腺泡细胞退行性病变的作用。方法：1. 用3H-TdR掺入法了解细胞DNA合成。2. 用TUNEL 染色法检测细胞凋亡。3. 建立裸鼠胰腺癌移植瘤模型，观察胰腺癌细胞在体内的生长情况。4. 用免疫化学法检测胰腺癌组织或细胞的COX-2、PCNA、VEGF及胰腺癌组织Ⅷ因子相关抗原、c-Fos蛋白及胰腺腺泡细胞COX-2的表达。5. 用Western-blot分析胰腺癌细胞c-Fos、ERK表达的改变。6. 用明胶酶法或RT-PCR法检测MMP-2酶原及MMP-2基因表达。7. 采用凝胶迁移电泳技术检测AP-1活化。8. 用光学显微镜观察胰腺组织病理及腺泡细胞的改变。9. 用电子显微镜观察胰腺腺泡细胞超微结构的改变。10. 用比色法检测胰腺组织匀浆的淀粉酶及脂肪酶。结果：胰腺癌细胞株BXPC-3有COX-2表达，三种COX-2选择性抑<WP=9>1. 制剂均能抑制胰腺癌细胞株COX-2的表达。2. 三种COX-2选择性抑制剂均能有效抑制体外培养的胰腺癌细胞DNA合成，其抑制效应与药物浓度及对COX-2选择性抑制作用呈显著正相关。3. 罗非昔布可促使胰腺癌细胞凋亡，凋亡发生率为25%(0.6%，而对照组仅偶见凋亡细胞。4. 罗非昔布使胰腺癌细胞或组织PCNA表达下调。5. 罗非昔布可抑制胰腺癌细胞VEGF的表达，使移植瘤组织MVD（1.5±0.2个/高倍视野）较对照组（4.7±1.5个/高倍视野）明显下降，降低胰腺癌细胞MMP-2的基因表达及其酶活性。6. 胰腺癌细胞有低水平AP-1活化，罗非昔布能抑制胎牛血清刺激的AP-1结合活力，其抑制作用与剂量有关。7. 罗非昔布可剂量依赖性地抑制胰腺癌细胞ERK-1、ERK-2的表达。8. 罗非昔布可使胰腺癌细胞和组织c-Fos的表达下调。9. 罗非昔布对胰腺癌裸鼠移植瘤的抑瘤率为87.7%，与对照组比较，罗非昔布可促使裸鼠移植瘤纤维组织增生。长期使用罗非昔布，对重要脏器未见明显损害。10. 长期饮酒可使大鼠胰腺腺泡细胞质空泡化，细胞内脂滴增加，酶原颗粒减少，髓样结构形成。酒精所致胰腺腺泡细胞早期病变时，其胰腺组织匀浆淀粉酶（2807.26(50.10 U·G-1组织）、脂肪酶（3650.00(80.18U·G-1<WP=10>11. 组织）均较对照组（淀粉酶和脂肪酶分别为6532.87 (100.11U·G-1组织、10193.06(206.27 U· G-1组织）显著降低，P<0.05。 12. 饲料中蛋白质比例过高或过低均可加重酒精对大鼠胰腺腺泡细胞的损害作用，高蛋白质饲料组可见线粒体普遍肿胀，低蛋白饲料组除可见线粒体肿胀、髓样结构形成、粗面内质网扩张外，还可见部分细胞质溶解坏死。高、低蛋白质饲料均可促使细胞COX-2的表达增加，细胞凋亡增加。 13. 与对照组比较，严重的酒精相关性胰腺腺泡细胞退行性变时，腺泡细胞有COX-2表达。 14. 与对照组比较，过高、过低蛋白质饲料组大鼠胰腺组织匀浆淀粉酶、脂肪酶减低，过低蛋白质饲料组大鼠淀粉酶、脂肪酶减低最明显，罗非昔布可使过高、过低蛋白质饲料组大鼠胰腺组织匀浆淀粉酶、脂肪酶含量增加。15. 罗非昔布可抑制腺泡细胞COX-2表达，使高蛋白饲料组胰腺腺泡细胞线粒体肿胀减轻，低蛋白饲料加罗非昔布组仍有线粒体肿胀，粗面内质网扩张，但未见细胞坏死。高蛋白饲料组、高蛋白饲料加罗非昔布组、低蛋白饲料组、低蛋白饲料加罗非昔布组细胞凋亡率分别为2.10%±0.10%、1.50%±0.30%、6.60%±1.00%、4.30%±0.50%。结论：三种选择性COX-2抑制剂均能抑制人胰腺癌细胞的生长，并<WP=11>1. 诱导细胞凋亡, 对COX-2的选择性越高，对胰腺癌生长的抑制作用越强。2. 罗非昔布抑制裸鼠胰腺癌的生长，机制可能与抑制胰腺癌血管形成有关。3. 罗非昔布可通过抑制AP-1、ERK信号传导通路，从而抑制肿瘤生长，促进肿瘤细胞凋亡。4. 酒精可损伤大鼠胰腺腺泡细胞内质网和线粒体等膜性结构，使腺泡细胞呈退行性?