目的：利用RNAi技术沉默人肺腺癌A549细胞株STAT3基因，Western blot检测对STAT3、CyclinD1、Bcl—2、BAX、Caspase—9蛋白表达的影响及其相关性分析。 方法：1．根据siRNA的设计原则，设计并采用化学合成法合成STAT3siRNA1、STAT3siRNA2、STAT3siRNA3，以脂质体介导下稳定转染人肺腺癌细胞系A549细胞（si—h—RNA组）作为研究对象，以转染si—h—RNA—Ncontrol A549细胞为阴性对照组，以未转染A549细胞作为空白对照组。于转染16h后荧光显微镜观察转染情况，通过将照片进行图像分析，观察转染效率。2．常规PCR检测RNA干扰的效率：于转染24h收集细胞，提取RNA后逆转录成cDNA，以靶基因STAT3为目的基因、管家基因β—actin为内参基因，设计引物进行扩增，将扩增产物琼脂糖凝胶电泳，检测目的条带及干扰效率。3．裂解细胞提取蛋白：在每瓶细胞中加入50ul细胞裂解液，用枪尖吹打混匀，冰上裂解30min，离心4℃，12000 rpm×20min，收集上清蛋白。4．蛋白免疫印迹法（Western—blot）：选择干扰效率最高的STAT3siRNA2组为实验组，分别检测si—h—RNA组、阴性对照组、空白对照组中STAT3，CyclinD1，BAX，Bcl—2，Caspase—9蛋白表达：用BCA试剂盒测定样品总蛋白浓度、聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）、考马斯亮蓝染色观察蛋白条带、电转移（electrotransfer）、封闭PVDF膜、免疫反应（加入一抗和二抗）、化学发光显示目的条带。5．图像分析：计算机扫描蛋白质条带，Image—Proplus图像分析软件进行分析。以蛋白条带的灰度值代表蛋白的表达量，用β—actin条带灰度值进行校正后代表蛋白相对表达水平，每个样本至少重复三次。分析si—h—RNA组、阴性对照组、空白对照组中STAT3蛋白与CyclinD1，Bcl—2，BAX，Caspase—9蛋白表达的差异及相关性。 结果：（1）si—h—RNA组STAT3、CyclinD1、，Bcl—2蛋白的表达水平均明显低于阴性组和空白组，而BAX，Caspase—9蛋白的表达水平均高于阴性组和空白组。前组分别与后两组比较，差异均有统计学意义（P<0．05）后两组比较差异无统计学意义。（2）经Person相关性分析显示：RNAi后人肺腺癌细胞A549中STAT3与CyclinD1蛋白表达呈正相关（P<0．05）；STAT3与Bcl—2蛋白表达呈正相关（P<0．05）；STAT3与BAX蛋白表达程负相关性（P<0．05）；STAT3与Caspase—9蛋白表达程无相关性（P>0．05）。 结论：1．成功合成STAT3siRNA，并将其成功转染入真核细胞中，能特异性下调STAT3mRNA及STAT3蛋白的表达，有效抑制肺癌细胞的增殖，诱导细胞凋亡。2．CyclinD1、Bcl—2蛋白在RNAi后表达强度均明显下降，通过实验证明其与STAT3的表达呈正相关，提示CyclinD1与STAT3、Bcl—2与STAT3之间存在着协同作用，沉默STAT3可抑制其下游基因CyclinD1、Bcl—2的表达，抑制肿瘤细胞生长，诱导肿瘤细胞凋亡，对抑制细胞恶性转化有重要作用。3．BAX与Caspase—9蛋白在RNAi后表达强度均明显增高，BAX与STAT3呈负相关，Caspase—9与STAT3无相关性，提示STAT3可能负调节BAX，降低Bcl—2/BAX比例而抑制细胞生长，促进细胞凋亡，而Caspase—9可能不参与STAT3信号转导途径，另有其他途径激活Caspase—9，或STAT3信号转导途径与其他信号转导途径共同激活Caspase—9。