目的：酒精性肝病(alcoholicliverdisease，ALD)是长期大量饮酒所致的肝脏损害性病变，其病理改变包括酒精性脂肪肝、酒精性脂肪性肝炎、酒精性肝纤维化及酒精性肝硬化。关于ALD的发病机理目前尚不清楚，近年来有人提出以氧化应激和脂质过氧化为中心的“二次打击”假说，“第一次打击”使脂类沉积在肝细胞，导致脂肪肝，“第二次打击”涉及内毒素、细胞因子参与的氧化应激和脂质过氧化。内质网(endoplasmicreticulum，ER)作为细胞中蛋白成熟的场所，可以很敏感的感受细胞内外环境的变化。当内质网内环境改变，细胞就会激活信号应对这些改变，并且重新恢复折叠蛋白的环境，内质网的这种改变就是内质网应激(endoplasmicreticulumstress，ESR)，而对这种应激作出的反应就是非折叠蛋白反应(UnfoldedProteinResponse，UPR)。内质网应激是内质网内未折叠或错误折叠蛋白积聚所致，适宜的应激有利于细胞内环境的恢复，然而严重而持久的内质网应激将导致细胞凋亡。肝细胞具有高度发达的内质网，是对内质网应激最敏感的细胞之一，目前的研究也表明在细胞和动物模型中，内质网应激参与了酒精性肝病的发病过程。葡萄糖调节蛋白-78(glucose-regulatedprotein，GRP78)，又称免疫球蛋白重链结合蛋白，与热休克蛋白70具有同源性，是存在于内质网上最多的伴侣蛋白，是内质网应激反应的标志性分子，并且具有保护细胞、对抗细胞凋亡的作用。胱硫醚β合成酶(cystathioninebeta-synthase，CBS)，为吡哆醛磷酸依赖性酶，主要在肝脏合成，是同型半胱氨酸(homocysteine，Hcy)代谢过程中的关键酶，其活性的降低是高同型半胱氨酸血症(Hyperhomocysteinemia,HHcy)发生的主要诱因之一。同型半胱氨酸(Hcy)在CBS的作用下，以维生素B6为辅助因子，与丝氨酸结合形成胱硫醚，进一步形成半胱氨酸和a-酮丁酸。Hhcy使内质网内错误折叠的蛋白增加，而诱发内质网应激，激活非折叠蛋白反应。本研究旨在应用酒精灌胃建立大鼠ALD模型，用比色法测定CBS活性，免疫组织化学染色及逆转录聚合酶链反应(reversetranscription-polymerasechainreaction，RT-PCR)的方法观察GRP-78蛋白及GRP-78mRNA的表达情况，探讨CBS在ALD发病过程的表达及意义，为有效防治ALD提供新的思路。　　 方法：选用雄性健康清洁级Wister大鼠50只，体重200±20g，正常饲养1周后随机分出10只为正常对照组，其余动物采用逐渐增加酒精浓度（浓度30％-60％，乙醇5-9g·kg-1·d-1）的方法酒精灌胃，分别于4周、8周、12周和16周末随机处死动物10只、9只、8只和8只，留取血清及肝组织标本；检测血清ALT、AST、TG、TC、HDL、LDL、VLDL、Hcy等生化指标；取部分肝组织立即冰冻切片行苏丹Ⅳ染色，观察肝细胞脂变性情况；另取肝组织固定于4％中性福尔马林溶液，石蜡包埋，5μm切片行苏木精-伊红（hematoxylin-eosin，HE）染色观察肝组织的普通病理改变，天狼红染色观察肝组织纤维化程度；并用石蜡切片进行免疫组织化学染色，观察肝组织GRP-78蛋白表达情况；余肝组织经液氮速冻后置于-80℃冰箱，用RT-PCR观察大鼠肝组织GRP-78mRNA的表达。　　 结果：　　 1血清肝功能指标的变化：随着造模时间的延长，血清ALT和AST水平逐渐升高，CHE逐渐降低，与正常对照组比较P＜0.05或P＜0.01。　　 2血清血脂指标的变化：随着造模时间的延长，血清TG、TC、LDL、VLDL的水平逐渐升高，HDL水平逐渐降低，与正常对照组比较P＜0.05或P＜0.01。　　 3肝组织病理学改变：4周大鼠肝细胞出现小叶中央静脉周围肝细胞脂肪变性，随着造模时间的延长，肝细胞脂肪变性逐渐加重，肝小叶内坏死灶明显增多和纤维组织增生，16周大鼠肝细胞呈现弥漫小泡性脂肪变性，窦周纤维化，汇管区纤维组织增生并有纤维间隔形成。冰冻切片苏丹Ⅳ染色显示正常对照组大鼠肝组织无脂肪变性，模型4周组大鼠肝细胞胞浆中出现少量红色脂滴，随着造模时间延长，红色脂滴逐渐增多，至16周表现为大量红色脂滴分布于肝细胞内。PAS染色显示正常组大鼠肝细胞胞浆中大量紫红色颗粒分布，模型16周仅见少量紫红色颗粒。天狼红染色显示模型4周组大鼠肝组织无明显纤维组织增生，模型12周组大鼠肝组织出现明显窦周纤维化和纤维化间隔形成趋势，模型16周组大鼠肝组织出现明显纤维间隔。　　 4血清同型半胱氨酸血症的变化：随着造模时间的延长，血清Hcy的水平逐渐升高，与正常对照组比较P＜0.05或P＜0.01。　　 5比色法检测大鼠肝组织CBS的表达：随着造模时间的延长，其表达量逐渐降低，与正常对照组比较P＜0.05。　　 6免疫组化法检测大鼠肝组织GRP-78蛋白的表达：光镜下，正常组大鼠肝脏内表达较少的GRP-78蛋白，随着造模时间的延长阳性表达逐渐增加，主要表达于肝细胞胞浆内，与正常对照组比较P＜0.05。　　 7RT-PCR法检测GRP-78mRNA的表达量：正常组大鼠肝组织中表达GRP-78mRNA较少，随着造模时间的延长，其表达量逐渐增加，与正常对照组比较P＜0.05。　　 8肝组织中的CBS相对表达量与血清Hcy水平呈负相关，相关系数分别为-0.632，P＜0.01。　　 9肝组织中CBS的相对表达量与肝组织中GRP-78的含量呈负相关，相关系数分别为-0.936，P＜0.01。10肝组织中GRP-78的相对表达量与Hcy的表达量呈正相关，相关系数为0.617，P值均＜0.01。　　 结论：　　 1应用逐渐增加酒精浓度和剂量灌胃的方法可以成功制备大鼠ALD模型，该模型肝脏病变如脂肪变性、炎症反应和纤维化等可以反映临床ALD的基本病变。　　 2在酒精性肝病的发病机制中，随着造模时间的延长，CBS活性逐渐降低，出现血清Hcy的水平逐渐升高，内质网应激反应的标志性分子GRP78表达量逐渐增加。　　 3ALD发病过程中存在内质网应激，内质网应激参与ALD的发病过程。