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本文研究目的:①研究磁性纳米微粒和砒霜磁性纳米微球的制备及其表征;②磁性纳米微粒和砒霜磁性纳米微球的细胞毒性检测;③磁性纳米微粒和砒霜磁性纳米微球的组织毒性检测;④磁性纳米微粒和砒霜磁性纳米微球磁感应加热治疗异种移植性肝癌的研究。
研究材料和方法:①采用化学共沉淀法制备砒霜磁性纳米微球,用透射电子显微镜(transmissionelectronmicroscope,TEM)等进行表征及特性检测。②通过溶血试验、微核试验、体外成纤维细胞培养、MTT实验等方法检测磁性纳米微粒的细胞毒性,进一步检测砒霜磁性纳米微球及其经交变磁场作用后对体外培养肝癌细胞生长的影响;③检测磁性纳米微粒和砒霜磁性纳米微球的小鼠LD50,将磁性纳米微粒和砒霜磁性纳米微球注入正常家猪肝脏观察对正常家猪肝组织的影响;④将磁性纳米微粒和砒霜磁性纳米微球注入到裸鼠人肝癌移植瘤中,经交变磁场(alternatingmagneticfield,AMF)照射3次,15d后测抑瘤率及外周血肿瘤转移相关基因表达的影响。
研究结果:①透射电镜和能谱仪(energydispersivespectrometer,EDS)表征:制备的磁性纳米微粒直径平均20nm,制得的As2O3磁性纳米微球圆形,直径平均100nm。②体外升温试验:在输出电流300A,输出功率4KW的AMF作用下不同浓度的微球混悬液能升温到41℃~54℃,且最终温度能稳定不变。③溶血试验、微核实验、成纤维细胞L929和肝癌细胞SMMC7721培养形态学观察、MTT实验证明磁性纳米微粒无细胞毒性、砒霜磁性纳米微球依其As2O3含量不同对成纤维细胞和肝癌细胞生长有抑制作用。④急性毒性试验,磁性纳米微粒和砒霜磁性纳米微球的LD50均大于5g/kg,将磁性纳米微粒和砒霜磁性纳米微球注入正常家猪肝脏后1到4周内家猪各组血清AST、ALT、Bun及Cr的均值之间相比均P>0.05,无显著性差异,肝脏等重要脏器无明显病理改变。⑤体内抑瘤试验:在AMF照射下,磁性纳米微粒的质量抑瘤率为68.74%,与对照组相比P<0.01;砒霜磁性纳米微球组移植瘤的质量抑瘤率为82.79%,与对照组相比P<0.001,均有显著性差异。实验组肿瘤组织有明显坏死,而瘤旁和内脏组织均未见明显损伤。⑤肿瘤转移相关基因检测:提取各组裸鼠外周血单个核细胞PNMBC,进行RT-PCR检测人CD44v6基因,磁性纳米微粒和砒霜磁性纳米微球AMF照射组表达率低于其它非照射组。
研究结论:①磁性纳米微粒和砒霜磁性纳米微球可用于肿瘤的磁感应热疗,并能达到控温、恒温的效果。②砒霜磁性纳米微球是一种较理想的靶向治疗肿瘤的新剂型,并可以同时发挥药物和磁感应加热的联合定向治疗作用,且对肝功、肾功没有明显的毒性,极可能成为一种肝癌治疗新途径。