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玉米大斑病是由大斑刚毛座腔菌（Setosphaeria turcica (Luttrell) Leonard&Suggs）引起的严重威胁玉米生产安全的重要真菌性病害之一。该病害多发生于全球低温潮湿地域的玉米产区。长期以来，生产实践中对该病的防治仍然是以抗病品种为主，但由于病菌变异频繁、病菌群体内生理分化明显、不同小种产生的毒素组分差异较大，故很难对其进行有效、准确监测，结果导致玉米品种抗性迅速丧失，给病害控制增加了难度。本课题组前期研究发现，cAMP信号途径（cAMP-dependent signal pathway）对玉米大班病菌的营养菌丝生长及致病性具有重要调控作用，并克隆了cAMP最主要的下游效应分子PKA催化亚基（PKA-C）基因StpkaC1，利用RNAi技术证明该基因调控病菌的营养生长、产孢及侵染过程。为进一步全面揭示PKA调控病菌生长及致病性的功能，本试验获得了一个新的玉米大斑病菌蛋白激酶A催化亚基基因（StpkaC2），并分别构建了StpkaC1和StpkaC2的敲除载体。利用聚乙二醇（polyethylene glycol，PEG）介导的原生质体转化技术获得了StpkaC1和StpkaC2的敲除突变菌株。主要结果如下：1.利用生物信息学方法，从JGI网站（http://genome.jgi-psf.org/）公布的玉米大斑病菌数据库中，获得了StpkaC1的同源基因，命名为StpkaC2。该基因编码区为1209bp，编码402个氨基酸。序列分析表明该基因编码产物具备PKA-C保守结构域。系统发育树显示StpkaC1和StpkaC2分属不同类型的PKA-C。2.利用qPCR技术分析StpkaC1和StpkaC2基因在分生孢子侵入生长不同阶段的表达规律，结果表明，StpkaC2基因相比于StpkaC1基因在芽管形成及附着胞的成熟阶段表达更活跃，StpkaC1和StpkaC2在侵入丝生长阶段表达均明显上调，分别达到分生孢子时期的3.5倍和4.2倍。3.对玉米大斑病菌StpkaC1和StpkaC2基因进行PEG介导的原生质体转化技术，经潮霉素抗性筛选、PCR、Southern blot检测各得到2株敲除突变菌株。4.对StpkaC1和StpkaC2基因的敲除突变菌株的表型特征进行了观察和分析，发现StpkaC1和StpkaC2基因敲除突变菌株发现与野生型相比，突变菌株的生长速度均较快，菌落颜色浅，气生菌丝较多，且突变菌株均出现产孢缺陷，产孢量为0。5.对StpkaC1和StpkaC2突变菌株的产黑色素能力进行了测定，突变菌株的黑色素产量较野生型相比，明显降低。6.对病菌穿透能力分析发现，在玻璃纸表面，StpkaC1敲除突变菌株菌丝可以诱导形成附着胞，但附着胞的形成过程明显延迟，且穿透玻璃纸的能力也降低。而StpkaC2敲除突变菌株菌丝不能诱导形成附着胞，也不能穿透玻璃纸。7．对StpkaC1和StpkaC2基因敲除突变菌株的粗毒素含量进行了测定，与野生型相比并未发生明显变化，但是该基因的敲除突变菌株对病菌的致病能力却明显低于野生型。