【摘 要】
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目的:探索体外巨噬细胞参与下,β-磷酸三钙（β-TCP）对骨髓间充质干细胞（BMSCs）成骨分化的调控,并进一步研究β-TCP引发巨噬细胞极化以及巨噬细胞基因、蛋白表达改变的分子机制。方法:将BMSCs和巨噬细胞以4:1的比例体外共培养,用不同浓度的β-TCP浸提液（50、25、12.5、6.25、Omg/mL）诱导共培养细胞,将相同方法单独培养的BMSCs作为对照组。在诱导后第7天,采用茜素红染
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目的:探索体外巨噬细胞参与下,β-磷酸三钙（β-TCP）对骨髓间充质干细胞（BMSCs）成骨分化的调控,并进一步研究β-TCP引发巨噬细胞极化以及巨噬细胞基因、蛋白表达改变的分子机制。方法:将BMSCs和巨噬细胞以4:1的比例体外共培养,用不同浓度的β-TCP浸提液（50、25、12.5、6.25、Omg/mL）诱导共培养细胞,将相同方法单独培养的BMSCs作为对照组。在诱导后第7天,采用茜素红染色和碱性磷酸酶（ALP）染色观察BMSCs成骨分化情况;采用qRT-PCR技术检测成骨相关基因ALP、OPN、OCN、Runx2、COL1的表达;采用Western blot技术检测ALP、COL1蛋白的表达。进一步用浓度为25mg/mL β-TCP浸提液培养巨噬细胞,以未用β-TCP培养的巨噬细胞作为对照组,在材料培养后第7天,用基因芯片技术检测差异表达的基因;采用流式细胞仪检测巨噬细胞表面标记CD11c和CD206;采用qRT-PCR和Western blot法检测Wnt通路相关调节剂WNT6、WIF1基因和蛋白表达。结果:茜素红和ALP染色显示,与对照组相比,不同浓度β-TCP均可促进共培养的BMSCs成骨分化;成骨相关基因ALP、0PN、COL1和蛋白ALP、COL1表达水平均比对照组升高,差异有显著性意义（P<0.05）;25mg/mL的β-TCP作用下的巨噬细胞的免疫反应上调,极化为M2型,且WNT6,WIF1的基因和蛋白表达水平分别比对照组上升和下降（P<0.05）。结论:β-TCP通过引发巨噬细胞M2极化和调控Wnt信号通路的WNT6、WIF1表达,促进BMSCs成骨分化。
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