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碘化N-正丁基氟哌啶醇（N-n-butyl haloperidol iodide,F2）是我们实验室在氟哌啶醇（haloperidol,Hal）的基础上改造合成的一种新型钙拮抗剂。前期研究发现，F2无论是对整体的心肌缺血再灌注（ischemia/reperfusion,I/R）损伤还是对离体的心肌细胞缺氧/复氧（hypoxia/reoxygenation,H/R）损伤均有保护作用，其作用机制可能与阻断心肌细胞细胞膜上L-型钙通道，拮抗心肌细胞钙超载，抑制早期生长反应基因-1（early growth response gene-1,Egr-1）过表达有关。自噬是细胞内溶酶体依赖地分解代谢损伤的蛋白和细胞器的过程，在清除细胞质中功能紊乱的成份中发挥着重要的作用，它的主要功能是通过调节细胞存活和死亡途径维持细胞自身稳态。近年来，越来越多的报道认为自噬与心肌I/R损伤密切相关，过度的自噬可加重心肌I/R损伤。因此，使用H9c2心肌细胞建立心肌细胞H/R损伤模型，观察心肌细胞 H/R过程中自噬的变化。随后，采用自噬抑制剂和激动剂观察心肌细胞H/R损伤的变化，明确自噬在心肌细胞H/R损伤中的作用。观察F2对H/R诱导的心肌细胞自噬的影响，进一步探讨和明确F2抗心肌细胞H/R损伤的分子机制。 方法： 1.培养的H9c2心肌细胞换用被高纯度的氮气饱和30min的缺氧液，置于密闭且充满高纯度氮气的缺氧盒中，37℃培养箱中缺氧培养1h，随后换用正常培养基，置于37℃、饱和湿度、5％CO2培养箱中继续培养3h，造成H/R损伤。 2. MTT法测定心肌细胞存活率、比色法测定细胞上清液中乳酸脱氢酶（lac tate dehydrogenase,LDH）的漏出，以反映心肌细胞损伤的程度；Annexin V-FITC/PI双染法检测心肌细胞早期凋亡和晚期凋亡、蛋白免疫印迹法检测Bcl-2、Bax、cyto C以及cleaved caspase-3蛋白表达的变化，比色法检测caspase-3活性，以反映H/R所致心肌细胞凋亡程度。 3. MDC染色观察酸性自噬泡结构、TEM观察细胞超微结构、蛋白免疫印迹法检测LC3、P62、Atg5以及Beclin1蛋白表达的变化、定量PCR检测自噬相关基因Atg5、Beclin1 mRNA的表达，以反映H/R所致的心肌细胞自噬。 4.蛋白免疫印迹及RNA干扰研究自噬信号通路。 结果： 1.F2能减轻心肌细胞H/R损伤，使细胞存活率升高，LDH漏出减少，ca spase-3活性降低，凋亡程度减轻。 2.蛋白免疫印迹技术发现，自噬经典抑制剂3-甲基嘌呤（3-MA）抑制H/R诱导的心肌细胞自噬，减少细胞凋亡的发生；而激动剂Rapa myc in能促进心肌细胞自噬，加重细胞凋亡的发生。 3.MDC染色、透射电子显微镜（TEM）及蛋白免疫印迹等实验发现，F2能抑制H/R诱导的心肌细胞自噬。 4.定量PCR及蛋白免疫印迹发现，F2能抑制H/R后自噬相关基因Atg5、Beclin1 mRNA及蛋白的表达。 5.蛋白免疫印迹及siRNA干扰技术发现，沉默MIF可减少H/R诱导的自噬，增加p-mTOR蛋白的表达；F2通过MIF/mTOR信号通路抑制H/R诱导的心肌细胞自噬。 结论： 1.抑制H9c2心肌细胞H/R过程中自噬的发生，进而能够减轻H/R诱导的心肌细胞凋亡；F2抑制H/R诱导的H9c2心肌细胞自噬-凋亡，这是其抗心肌缺血再灌注损伤重要机制。 2.F2抑制H/R诱导的自噬与ATGs相关，属典型自噬。 3.F2通过调控MIF/mTOR信号通路抑制H/R诱导的细胞自噬。