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目的：观察补肾法、疏肝法对体外受精-胚胎移植（IVF-ET）患者妊娠结局的影响；研究两法改善妊娠结局，提高卵母细胞质量的作用与GDF-9分泌因子及其Smads信号通路的关系，比较两法作用机制的异同，为补肾法、疏肝法治疗排卵障碍性疾病的临床应用提供实验依据。方法：2011年7月至2012年9月于白求恩国际和平医院妇产科生殖医学中心行IVF-ET的符合纳入标准和排除标准的60例不孕症患者，所有受试患者需经医院伦理委员会批准，签署知情同意书。其中符合中医肾虚证标准的女性患者20例为补肾组，符合中医肝郁证标准的女性患者20例为疏肝组，设符合诊断标准的20例患者为对照组。补肾组为中药补肾调经方+西药控制性超排卵组，疏肝组为逍遥散+西药控制性超排卵组，对照组为单纯性控制性超排卵组。观察注射HCG日血清中E2、P、LH水平、获卵个数、受精数、优质胚胎数。留取两侧卵巢所有直径≥18mm的优势卵泡的卵泡液，用人淋巴细胞分离液分离出颗粒细胞。另将采集于白求恩国际和平医院妇产科生殖医学中心和石家庄市四院生殖医学中心的因输卵管因素行IVF-ET的正常患者的含有颗粒细胞的卵泡液用人淋巴细胞分离液分离出颗粒细胞，用含有10%胎牛血清的1640培养基培养颗粒细胞，24h后细胞贴壁，分别加入补肾调经方和逍遥散的高浓度(18%)、中浓度(12%)、低浓度(6%)人含药血清处理细胞6h、12h、24h、48h，分别为补肾高、中、低剂量组和疏肝高、中、低剂量组。加正常人血清的标本为0h即空白对照。采用实时荧光定量PCR方法检测颗粒细胞中GDF-9、BMPR-II、Alk5、Smad2/3/4mRNA的表达；采用细胞免疫荧光方法检测颗粒细胞中GDF-9、BMPR-II、Alk5、Smad2/3/4蛋白的表达；用Incell-western方法检测培养的颗粒细胞中GDF-9、BMPR-II、Alk5、Smad2/3/4蛋白的表达。结果：1补肾法、疏肝法对IVF-ET患者治疗结果的影响1.1HCG日各组患者血清中E2、P、LH水平与对照组比较，补肾组、疏肝组血清E2水平均增高（均P<0.05），有统计学意义。与疏肝组比较，补肾组血清E2水平有下降趋势，但无统计学意义(P>0.05)。与对照组相比较，补肾组、疏肝组血清LH、P无统计学意义(P>0.05)。1.2各组患者获卵个数、受精数、优质胚胎数与对照组比较，补肾组、疏肝组获卵个数无统计学意义(P>0.05)，受精数明显增多（均P<0.05）。与疏肝组比较，补肾组受精数有增多趋势，但无统计学意义（P>0.05）。与对照组比较，补肾组、疏肝组的优质胚胎个数明显增多（均P<0.05）。与疏肝组比较，补肾组优质胚胎个数略减少，无统计学意义（P>0.05）。2补肾法、疏肝法对IVF-ET患者颗粒细胞GDF-9、BMPR-II、ALK5、Smad2、Smad3、Smad4mRNA表达的影响与对照组比较，补肾组和疏肝组颗粒细胞中GDF-9mRNA表达明显增强（均P<0.05）。与疏肝组相比较，补肾组颗粒细胞GDF-9mRNA表达增强，有统计学意义（P<0.05）。与对照组比较，补肾组和疏肝组颗粒细胞BMPR-IImRNA表达有增强趋势，但无统计学意义（P>0.05）。与对照组比较，补肾组和疏肝组颗粒细胞ALK5mRNA表达有增强趋势，但无统计学意义（P>0.05）。与对照组比较，补肾组和疏肝组颗粒细胞Smad2mRNA表达明显增强（均P<0.05）。与疏肝组比较，补肾组颗粒细胞Smad2mRNA表达增强，有统计学意义（P<0.05）。与对照组比较，补肾组和疏肝组颗粒细胞Smad3mRNA表达明显增强（均P<0.05）。与疏肝组比较，补肾组颗粒细胞Smad3mRNA表达增强，有统计学意义（P<0.05）。与对照组比较，补肾组和疏肝组颗粒细胞Smad4mRNA表达有增强趋势，但无统计学意义（P>0.05）。3补肾法、疏肝法对IVF-ET患者颗粒细胞GDF-9、BMPR-II、ALK5、Smad2、Smad3、Smad4蛋白表达的影响与对照组比较，补肾组和疏肝组颗粒细胞GDF-9蛋白表达增强（均P<0.05）。与疏肝组相比较，补肾组GDF-9蛋白表达增强，有统计学意义（P<0.05）。与对照组比较，补肾组和疏肝组的BMPR-II蛋白表达有增强趋势，但无统计学意义（均P>0.05）。各组颗粒细胞中ALK5蛋白未见表达。与对照组比较，补肾组和疏肝组颗粒细胞Smad2蛋白表达增强（均P<0.05）。与疏肝组相比较，补肾组颗粒细胞Smad2蛋白表达显著增强，有统计学意义（P<0.05）。与对照组比较，补肾组和疏肝组颗粒细胞Smad3蛋白表达增强（均P<0.05）。与疏肝组相比较，补肾组颗粒细胞Smad3蛋白表达显著增强，有统计学意义（P<0.05）。与对照组比较，补肾组和疏肝组颗粒细胞Smad4蛋白表达有增强趋势，但无统计学意义（P>0.05）。4补肾调经方、逍遥散含药血清对体外培养人卵巢颗粒细胞不同时间点GDF-9、BMPR-II、ALK5、Smad2、Smad3、Smad4蛋白表达的影响与0h比较，补肾高、中、低剂量，疏肝高、中、低剂量中药孵育颗粒细胞6h、12h、24h、48h GDF-9蛋白表达均增强（P<0.05）。6h GDF-9蛋白表达明显高于12h、24h、48h（P<0.05）。与补肾高、中、低剂量中药孵育颗粒细胞6h比较，疏肝高、中、低剂量GDF-9蛋白表达均下降（P<0.05）。与6h补肾高剂量中药孵育颗粒细胞比较，补肾中、低剂量GDF-9蛋白表达均下降（P<0.05）。与6h疏肝高剂量中药孵育颗粒细胞比较，疏肝中、低剂量GDF-9蛋白表达均下降（P<0.05）。与0h比较，补肾高、中、低剂量，疏肝高、中、低剂量中药孵育的颗粒细胞6h、12h、24h、48h BMPR-II蛋白表达有增强趋势，无统计学意义（P>0.05）。与补肾高、中、低剂量比较，疏肝高、中、低剂量BMPR-II蛋白表达有增强趋势，无统计学意义（P>0.05）。与0h比较，补肾高、中、低剂量，疏肝高、中、低剂量中药孵育的颗粒细胞6h、12h、24h、48hALK5蛋白表达下降，无统计学意义（P>0.05）。与补肾高、中、低剂量比较，疏肝高、中、低剂量ALK5蛋白表达下降，无统计学意义（P>0.05）。与0h比较，补肾高、中、低剂量，疏肝高、中、低剂量中药孵育颗粒细胞6h、12h、24h、48h Smad2蛋白表达均增强（P<0.05）。48h Smad2蛋白表达明显高于6h、12h、24h（P<0.05）。与补肾高、中、低剂量中药孵育颗粒细胞48h比较，疏肝高、中、低剂量Smad2蛋白表达均下降（P<0.05）。与48h补肾高剂量中药孵育颗粒细胞比较，补肾中、低剂量Smad2蛋白表达均下降（P<0.05）。与48h疏肝高剂量中药孵育颗粒细胞比较，疏肝中、低剂量Smad2蛋白表达均下降（P<0.05）。与0h比较，补肾高、中、低剂量，疏肝高、中、低剂量中药孵育颗粒细胞6h、12h、24h、48h Smad3蛋白表达均增强（P<0.05）。48h Smad3蛋白表达明显高于6h、12h、24h（P<0.05）。与补肾高、中、低剂量中药孵育颗粒细胞48h比较，疏肝高、中、低剂量蛋白Smad3表达均下降（P<0.05）。与48h补肾高剂量中药孵育颗粒细胞比较，补肾中、低剂量Smad3蛋白表达均下降（P<0.05）。与48h疏肝高剂量中药孵育颗粒细胞比较，疏肝中、低剂量Smad3蛋白表达均下降（P<0.05）。与0h比较，补肾高、中、低剂量，疏肝高、中、低剂量中药孵育的颗粒细胞6h、12h、24h、48h Smad4蛋白表达有下降趋势，但无统计学意义（P>0.05）。与补肾高、中、低剂量比较，疏肝高、中、低剂量Smad4蛋白表达，无统计学意义（P>0.05）。结论：1.在服用西药同时加用补肾调经方、逍遥散均不会降低获卵数，并能增加优质卵母细胞数量，提高妊娠率及总胚胎数。2.补肾调经方、逍遥散提高卵母细胞质量的作用与上调颗粒细胞中GDF-9及其Smads通路中Smad2、Smad3mRNA及蛋白的表达有关，并呈现出量效关系，两方均以高剂量效果更强。3.卵巢颗粒细胞与补肾调经方、逍遥散孵育6h时GDF-9蛋白的表达达高峰，孵育48h时Smad2、Smad3蛋白的表达达高峰，而补肾组高剂量的表达均优于疏肝组的高、中、低剂量。补肾组颗粒细胞中GDF-9及其Smads通路中Smad2、Smad3mRNA及蛋白的表达高于疏肝组。提示补肾法改善卵母细胞质量的作用优于疏肝法。