第一部分H₂O₂诱导的脐静脉内皮细胞氧化应激模型的建立及评价目的：用H202建立脐静脉内皮细胞氧化应激的模型，并对其进行评价。方法：将脐静脉内皮细胞分为6组：正常组，阳性对照组，50μmol/LH₂O₂组，100μmol/LH₂O₂组,200μmol/LH₂O₂组,400μmol/LH₂O₂组。细胞氧化应激模型建立方法：按照上述的分组及H₂O₂浓度，分别放于培养箱中6h，12h，24h，正常组加入相同体积的1×PBS。然后用DCFH-DA探针装载后于荧光显微镜下直接观察细胞中的ROS荧光，用流式细胞术检测细胞内活性氧的含量。结果：H₂O₂可以诱导细胞内ROS的生成，不同浓度的H₂O₂作用不同的时间，脐静脉内皮细胞内的ROS生成量也不同，在24h时间点细胞内氧化应激达到高峰，并且随着H₂O₂刺激浓度的升高，细胞内的ROS呈先增高后降低的趋势，在H₂O₂浓度为100μmol/L时作用最为显著，随后细胞内ROS逐渐减少，细胞坏死率比例上升。荧光图片与流式细胞术检测的结果一致。结论：100μmol/L H₂O₂与脐静脉内皮细胞在37℃,5%CO₂培养箱中共同培养24小时，可以导致细胞内活性氧含量显著升高，成功建立脐静脉内皮细胞氧化应激模型。第二部分尼可地尔对细胞氧化应激模型的影响目的：观察尼可地尔对氧化应激细胞模型内活性氧形成以及参与细胞内氧化还原关键的蛋白质家族之一——硫氧还蛋白表达的影响方法：脐静脉内皮细胞分为四大组：①正常脐静脉内皮细胞组，②氧化应激模型组，③尼可地尔+氧化应激模型组，④尼可地尔+氧化应激模型+格列苯脲组。以上各组均在37℃,5％CO₂培养箱中孵育24小时，采用流式细胞术检测各组细胞中ROS的含量，分别使用RT-PCR和Western-Blot方法检测各组细胞内硫氧还蛋白mRNA及蛋白质的表达。结果：尼可地尔可以减少脐静脉内皮细胞氧化应激模型中活性氧的形成，同时细胞内硫氧还蛋白的量有相应变化;钾离子通道阻断剂格列苯脲可以阻断尼可地尔对脐静脉内皮细胞的作用，这与硫氧还蛋白表达的变化有关。结论：在体外脐静脉内皮细胞氧化应激模型中，尼可地尔可以减少模型内活性氧的生成，这可能与它调节硫氧还蛋白的表达有关。