花鲈和军曹鱼部分细胞因子基因的克隆及表达特征研究

来源 :中国科学院海洋研究所 | 被引量 : 1次 | 上传用户:suing
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本论文以我国海水经济鱼花鲈(Lateolabrax japonicus)和军曹鱼鱼(Acanthopagrus schlegeli)为研究对象,采用同源克隆、快速扩增cDNA末端技术(Rapid amplification of cDNA ends,RACE)和半定量RT-PCR技术,对白介素1β(Interleukin 1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子α(Tumor necrosis factor,α TNFα)和翻译肿瘤调控蛋白(Translationally control tumor protein,TCTP)等基因进行克隆及表达特征研究,现将主要结果分述如下:1.花鲈和军曹鱼IL-1 β cDNA的克隆与表达花鲈IL-1β cDNA全长1310bp,包括一个136bp的5末端非编码区(untranslated region,,UTR)和一个430bp的3UTR,其开放式读码框(open readingframe,ORF)长774bp,可编码258个氨基酸组成的白介素1β前体蛋白,预测分子量为29.31kDa,等电点为5.64.军曹鱼IL-1β的cDNA全长1,104 bp,3′UTR为255bp,5′UTR 为108 bp,ORF为738bp,编码246个氨基酸,分子量大约为27.68kDa,理论等电点为5.71.同源性分析表明克隆的花鲈和军曹鱼IL-1β cDNA序列与其它鱼类甚至哺乳动物的IL-1β基因具有很高的相似性.预测蛋白都包含有1个IL-1β家族的签名序列(signature),并与其它非哺乳类动物的IL-1β一样缺乏信号肽和白介素1β转换酶(interleukin 1β converting enzyme,ICE)切点.2.花鲈TNFα cDNA的克隆与表达利用同源克隆和RACE技术克隆到花鲈TNF α cDNA的全长序列.序列全长990 bp,3′UTR为192 bp,5′UTR为72 bp,ORF为723 bp,可编码241个氨基酸,分子量大约为26kDa.同源性分析表明该序列与其它鱼类甚至哺乳动物的TNF α基因具有很高的相似性,并含有TNF家族的签名序列(signature).在氨基酸序列中发现一个潜在的跨膜区域.3.花鲈TCTP cDNA的克隆与表达分析利用同源克隆技术和锚定PCR技术从花鲈中克隆到TCTP基因的全表达序列.基因cDNA全长994bp,3′UTR为433 bp,5′UTR为47bp,ORF为510bp,可编码170个氨基酸,分子量大约为19.253kDa,理论等电点为4.55.序列分析可以看到TCTP家族的签名序列,一个N-glycosylation位点和5个Casein kinase Ⅱ phosphorylation位点.
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