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由于固定化酶优异的性能,固定化酶广泛应用于食品,环境,分析化学,医药以及生物技术等许多领域。固定化酶具有更好的稳定性,容易从反应介质中分离出来,可实现多次重复使用。
本研究涉及三方面的内容:一是新型甲壳胺颗粒的制备及在固定化酶方面的应用;二是建立一种新的固定化酶方法,即在多孔材料中捕捉交联酶微晶;三新型胶体颗粒的制备及用于酶的固定化。
甲壳胺颗粒的制备及在固定化酶方面的应用:以乙酸水溶液为熔剂配制甲壳胺溶液,向该溶液中加入可溶性盐类得到乳状混合液,然后用NaOH调至碱性,即得甲壳胺颗粒。所得甲壳胺颗粒大小分布在微米级,并表现出多空性。为增强甲壳胺颗粒的机械强度,防止甲壳胺颗粒在酸性溶液中溶解,并提供固定化酶所需的活性反应基团,用双官能团试剂戊二醛对甲壳胺颗粒交联处理。戊二醛处理后的甲壳胺颗粒作为载体用于固定化酪氨酸酶研究,发现所得的固定化酶具有高的蛋白载量(80mg/g载体)和高的酶活力(350单位/g载体)。
在多孔材料中捕捉交联酶微晶:捕捉交联酶微晶过程分为三步:第一步是把多孔氧化硅浸入酪氨酸酶溶液,使酶溶液充满多孔材料;第二步是使充满酶溶液的多孔材料与沉淀剂溶液接触,使酶分子在材料的孔道中形成晶体;第三步用戊二醛进行处理,使孔道中的酶晶体交联形成不溶晶体。所得固定化酶具有高的蛋白载量(420mg/g载体)和高的酶活力(超过1600单位/g载体)。固定化酶具有高的热稳定性,抗有机熔剂及尿素稳定性,以及机械稳定性。
新型胶体颗粒的制备及用于酶的固定化:在聚乙烯醇存在下,苯醌与芳香二胺反应得到聚合物胶体颗粒;试验证明这种胶体是固定化酶的良好载体。