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目的：构建LTB-NspA重组蛋白疫苗，经腹腔注射途径免疫BALB/c雌性小鼠，探讨黏膜免疫佐剂LTB是否能够增强疫苗抗原NspA的体液免疫（尤其是黏膜免疫）及细胞免疫应答水平，初步评价LTB-NspA重组蛋白疫苗对小鼠的免疫保护作用，为研制有效抗B群脑膜炎奈瑟菌的蛋白疫苗提供相关实验依据。方法：分别以大肠杆菌标准菌株H44815基因组和B群脑膜炎奈瑟菌标准株MC58基因组为模板，运用PCR及重叠延伸PCR技术，构建原核重组表达载体pET-30a/ltb、pET-30a/nspa和pET-30a/ltb-nspa，大量表达重组蛋白，经His亲和层析纯化柱咪唑浓度梯度洗脱，收集重组蛋白，蛋白印迹法（Western blot）鉴定其抗原性；腹腔注射途径免疫BALB/c雌性小鼠，酶联免疫吸附法（ELISA）检测蛋白疫苗免疫后的小鼠血清中抗NspA的IgG及其亚类抗体水平、小鼠生殖道黏膜分泌液中抗NspA的SIgA抗体水平及小鼠脾淋巴细胞培养上清液中IL-4、IFN-γ水平，CCK8法检测小鼠的脾淋巴细胞增殖反应；计算LTB-NspA重组蛋白疫苗对BALB/c雌性小鼠的免疫保护率。结果：经双酶切和测序鉴定，成功构建了三个原核表达载体：pET-30a/ltb、pET-30a/nspa和pET-30a/ltb-nspa；分别优化重组蛋白的诱导表达条件后，重组蛋白均能在上清中以可溶性状态表达，表达产物采用His树脂纯化后经Western-blot鉴定，证实目的蛋白的存在；腹腔注射途径免疫BALB/c雌性小鼠，LTB-NspA组血清特异性IgG及IgG1、IgG2a、IgG3和生殖道黏膜产生的特异性SIgA随免疫时间均呈上升趋势，IgG2b在第4周达峰值：LTB-NspA组IgG、IgG2a水平明显高于NspA组(P<0.05)；LTB-NspA组IgG1水平在6w时明显高于NspA组(P<0.05)；LTB-NspA组IgG2b水平2w、4w时明显高于NspA组(P<0.05)；LTB-NspA组IgG3、SIgA水平在4w、6w时明显高于NspA组(P<0.05)；而对照组PBS组和LTB组间抗体水平无显著性差异(P>0.05)。LTB-NspA组IgG2a/IgG1的比值，在免疫的2w、4w、6w时分别为0.808、0.840和0.943，比值均小于1；LTB-NspA组IL-4含量（204.778±18.936）pg/mL明显高于NspA组(146.896±13.281) pg/mL (P<0.05)，LTB-NspA组IFN-γ含量（129.210±18.621）pg/mL明显高于NspA组(65.428±14.326) pg/mL (P<0.05)； LTB-NspA组和NspA组的脾淋巴细胞刺激指数（SI）明显高于PBS组和LTB组（P<0.05），两蛋白组间SI无明显差异(P>0.05)；LTB-NspA组小鼠免疫血清补体介导的体外杀菌效价（6w）达1：64；小鼠感染MC58后72h，LTB-NspA组小鼠的存活率（90%）高于NspA组小鼠的存活率（70%），而PBS组和LTB组的存活率为0。结论：1.LTB-NspA蛋白疫苗能够诱生较高水平的特异性体液免疫和细胞免疫，且以Th2倾向性体液免疫应答为主；黏膜免疫佐剂LTB可有效提高NspA基因诱导的特异性黏膜免疫应答水平及血清IgG抗体水平；2.LTB-NspA蛋白疫苗对感染B群脑膜炎奈瑟菌的BALB/c小鼠具有良好的免疫保护效果。