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肿瘤是严重威胁人类健康的一种疾病,而且由于具有易于扩散和转移等特点,目前尚缺乏有效的治疗手段。Cyclin D1作为细胞进入增殖周期合成的第一个周期蛋白,和CDK4/CDK6形成蛋白复合物,在调控细胞周期G1/S期转换过程中发挥着至关重要的作用。研究发现,在多种恶性肿瘤和癌变组织中,都存在着Cyclin D1的过度表达现象,而且与肿瘤的发生、发展密切相关,所以,Cyclin D1可作为肿瘤治疗的一个重要潜在靶点。研究者们以Cyclin D1为靶点的基因治疗主要集中在反义寡核苷酸、RNA干扰、化学药物治疗等方面。但是这些方法都存在稳定性差、靶向性不强等问题,限制了这些方法在肿瘤治疗中的应用。近年来兴起的胞内抗体技术是以抗体作为效应分子,能够在细胞内高效地、特异地灭活靶蛋白的一种技术,为肿瘤的基因治疗开辟了新的思路。本课题组在先前的工作中,已经把携带内质网滞留型抗人Cyclin D1胞内scFv基因(ER-ADκ)的质粒,成功的转染进MCF-7细胞中,该基因在肿瘤细胞中得到有效表达并实现胞内抗体的目标定位,ER-ADκ的稳定表达能够显著抑制肿瘤细胞的生长和增殖,引起细胞周期阻滞,并明显诱导细胞凋亡。现在有研究证明Cyclin D1与肿瘤的浸润和迁移存在密切的关系,但我们得到的胞内抗体是否影响肿瘤浸润和迁移,及其抗肿瘤机制尚属未知。本研究通过软琼脂集落实验、划痕实验、Transwell实验分析,发现抗CyclinD1胞内抗体ER-ADκ能够显著性降低肿瘤的克隆形成能力、抑制MCF-7细胞的迁移和侵袭;通过Western-blot实验,发现相关周期蛋白、迁移因子等蛋白水平发生了变化,从而为该胞内抗体在肿瘤治疗中的应该提供实验依据。