经研究表明,WRKY转录因子参与植物的生长发育和胁迫应答等诸多生命活动。WRKY转录因子是与很多防御反应相关的正调控因子或负调控因子,但是关于WRKY家族参与橡胶树防御反应的调控机理研究较少。在橡胶树的基因组中,一共有111个基因编码HbWRKY转录因子,通过分析橡胶树叶片接种胶孢炭疽菌的转录组数据以及q RT-PCR验证发现,LOC110657646、LOC110673911、LOC110640762、LOC110652339这四个基因的表达水平差异最明显。将这四个基因过表达于烟草中会引起烟草叶片中活性氧不同程度的积累,特别是过表达LOC110640762引起烟草叶片活性氧积累程度是对照的6倍左右,因此将LOC110640762作为后续机理研究对象。1.LOC110640762基因c DNA长度为975 bp,编码蛋白大小约为35.8 k Da,其氨基酸序列含有一个WRKY-DNA结合结构域。对氨基酸序列和同源性的分析表明其与拟南芥中的At WRKY40和烟草中的Nt WRKY40同源性最高,故将其命名为HbWRKY40。2.HbWRKY40在橡胶树原生质体的亚细胞定位于细胞核内。3.在橡胶树叶片中,HbWRKY40的表达可被多种外源植物激素诱导,尤其是经水杨酸诱导后HbWRKY40的表达量是对照的15倍左右。4.将HbWRKY40过表达于拟南芥中增强了阳性苗对灰霉的抗病性。5.将HbWRKY40过表达于橡胶树原生质体中进行RNA-Seq,转录组测序结果表明,过表达HbWRKY40后,有145个基因的丰度上调,有6个基因的表达水平下调,其中有12个基因含有HbWRKY40的结合位点W-box,且这12个基因的表达水平在SA处理叶片后都发生了显著的变化,将这12个基因选为HbWRKY40在应对生物胁迫过程中直接调控的候选靶标基因。6.为了研究HbWRKY40是否直接与12个候选基因的启动子区结合从而调控其表达,通过染色质免疫共沉淀的方法,用Anti-GFP磁珠拉下DNA蛋白复合物,洗脱后经CHIP-q PCR分析表明12个候选基因中有10个基因的启动子区被HbWRKY40直接结合,说明这10个基因是HbWRKY40的下游靶基因。综上所述,HbWRKY40是橡胶树抗胶孢炭疽病的正调控因子。