A型肉毒毒素对人毛发生长及毛囊免疫豁免的影响

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目的:通过人毛囊体外培养模型以及干扰素γ诱导的人毛囊免疫豁免失衡模型,探讨A型肉毒毒素(BTXA)对人毛囊生长及免疫豁免的调节作用。方法:选取成年男性额颞部带完整毛囊组织的正常头皮组织,显微镜下分离人生长期毛囊后分为空白对照组、BTXA实验组、干扰素γ组。(1)建立人毛囊体外培养模型并连续培养8天,通过记录体外培养的人毛囊生长长度和毛球部形态学改变、分析毛囊周期指数(Hair cycle score,HCS)的变化,观察BTXA及干扰素γ对人毛发生长的影响。(2)建立干扰素γ(75IU/ml)诱导的人毛囊免疫豁免失衡模型,通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测MHC-Ⅰ类抗原HLA-ABC mRNA的表达以及免疫组织化学染色检测MHC-Ⅰ类抗原HLA-ABC、MHC-Ⅰ类提呈抗原相关分子β2-微球蛋白、MHC-Ⅱ类HLA-DP/DQ/DR等免疫豁免相关因子的表达,观察BTXA对免疫豁免的调节作用。结果:1.人生长期毛囊体外培养实验结果显示,在体外培养第2、4、6、8天,BTXA组(1、10IU/ml)以及干扰素γ(75IU/ml)模型组与空白对照组相比,各组毛囊生长长度均无显著差异。2.毛球部形态学观察结果发现,培养第4天,各组毛囊球部形态均表现为生长期。分析毛囊周期指数显示,各组毛囊周期指数与空白对照组相比均无明显差异。培养第8天,各组毛囊球部形态均表现为退行期。分析毛囊周期指数显示,各组毛囊周期指数与空白对照组相比均无明显差异。3.RT-PCR结果显示,与空白对照组相比,干扰素γ(75IU/ml)诱导HLA-ABC mRNA的高表达(P<0.01);与干扰素γ(75IU/ml)模型组相比,10IU/ml的BTXA可有效抑制干扰素γ(75IU/ml)诱导的HLA-ABC nRN 的高表达(P<0.01)。4.免疫组化染色结果显示,与空白对照组相比,干扰素γ(75IU/ml)诱导HLA-ABC、β2-微球蛋白、HLA-DP/DQ/DR蛋白的高表达(P<0.01);与干扰素γ(75IU/ml)模型组相比,l0IU/ml的BTXA可有效抑制干扰素γ(75IU/ml)诱导的HLA-ABC、β2-微球蛋白、HLA-DP/DQ/DR蛋白的高表达(P<0.01)。结论:1.BTXA对体外培养人毛囊生长无显著的影响。2.BTXA在体外对干扰素γ诱导的毛囊免疫豁免失衡具有一定的保护作用,其调控机制仍需要进一步研究。
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