论文部分内容阅读
研究背景恶性肿瘤是目前包括中国在内的世界上许多国家最主要的死亡原因之一,今后几十年内全球癌症患者人数还将持续上升。目前,化疗是许多恶性肿瘤的主要治疗手段之一。然而随着化疗药物在临床中的广泛应用,副作用和耐药性极大限制了化疗的疗效,进而导致患者预后极差。因此迫切需要更多的研究来识别新的治疗靶点及方案来缓解当前常规化疗的局限性。近年来有研究表明,小分子靶向药物与化疗药物联合治疗可通过协同效应显著提高单一成分的治疗效果,并呈现出高效低毒的优势。小分子靶向药物GZD824目前已经被证实可作为一种新型抑制剂在血液系统肿瘤中具有逆转伊马替尼耐药的疗效,但是GZD824在其他耐药肿瘤中的具体作用和作用机制尚未阐述。本文旨在研究小分子酪氨酸激酶抑制剂GZD824与常规化疗药物紫杉醇的联合应用对多药耐药癌细胞的体内外抗肿瘤活性及其作用机制。研究目的探索GZD824联合紫杉醇对多药耐药癌细胞的体内外抗肿瘤活性及其作用机制。研究方法1.通过细胞活性实验、克隆形成实验、流式细胞术检测细胞周期、细胞凋亡和裸鼠移植瘤模型抑制试验等,在细胞和动物两方面水平上证明GZD824联合紫杉醇对多药耐药癌细胞的增殖抑制作用;2.采用流式细胞术和蛋白印记技术检测GZD824联合紫杉醇处理多药耐药癌细胞内P-gp、FEN1的表达及功能变化;研究结果1.在SNU449、HCT116、MD-MBA-468肿瘤细胞中,紫杉醇单药处理组的细胞增殖抑制率分别为8.86%,11.89%,5.52%,而GZD824联合紫杉醇处理组的细胞增殖抑制率分别提高到72.85%,67.22%,75.82%,结果表明GZD824联合紫杉醇协同杀伤SNU449、HCT116、MD-MBA-468肿瘤细胞;同时有效逆转Bats72细胞对紫杉醇,多西紫杉醇以及卡巴他赛的耐药,逆转系数(IR)分别为6.62,5.14以及7.7倍;2.流式细胞术检测结果表明GZD824联合紫杉醇处理组较紫杉醇单药处理组,细胞周期G2/M期阻滞细胞比例从16.4%提高到74.5%;细胞凋亡率从6.81%提高到46.1%,表明GZD824和紫杉醇联合使用可显著增强肿瘤多药耐药细胞的G2/M期阻滞和细胞凋亡;3.裸鼠移植瘤模型试验表明GZD824联合紫杉醇处理组较紫杉醇单药组的肿瘤体积,重量均有显著的降低,肿瘤抑制率达84.6%,而各组小鼠体重无明显改变;4.GZD824联合紫杉醇对耐药相关蛋白P-gp的表达水平以及功能无明显影响,显著下调FEN1蛋白表达水平;研究结论1.GZD824联合紫杉醇有效杀伤多种肿瘤细胞及逆转肿瘤多药耐药,该作用可能与两药可共同促进细胞周期阻滞于G2/M期,诱导细胞凋亡有关;2.GZD824联合紫杉醇体内表现出显著的抗肿瘤效应,且表现出高效低毒特性,具有较好的应用前景;3.GZD824联合紫杉醇有效逆转肿瘤耐药可能是通过下调袢状核酸内切酶1(FEN1)表达而非依赖P-gp途径逆转肿瘤耐药;