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microRNA(miRNA)作为一类来自真核生物自身基因组的非编码小分子RNA，在植物生长发育过程中扮演着重要角色。目前，果树中已有关于苹果和葡萄miRNA的报道。miRNA序列的保守性特点将为研究基因组尚未解析的非模式植物中的miRNA奠定重要基础。虽然草莓微繁殖苗在我国生产中广泛应用，但发现仍然存在一些问题，其中最严重的就是表观遗传的变异问题。至今国内外未见任何关于草莓miRNA及miRNA表达与表观遗传变异之间关系的报道。本研究以栽培草莓为试材，全面系统地研究了草莓miRNA的种类、保守性特点和器官、繁殖方式、发育时期等对miRNA表达的影响，筛选出差异表达的miRNA，探索了miRNA在草莓植株生长发育过程中的可能作用，主要结果如下：1．在利用改进的CTAB法成功富集小于150 bp的小分子RNA的基础上，采用miRNA基因芯片，从草莓植株中检测到74个miRNA，有47个miRNA的荧光信号强度介于400和1500之间，27个miRNA荧光信号强度超过1500，其中来自miRNA数据库的46个miRNA属于21个miRNA家族。miR159是最大家族，拥有7个成员；miR169拥有5个成员；miR160，miR164，miR166和miR167各拥有4个成员；miR156，miR168和miR171均拥有2个成员；其余的12个家族：miR157，miR162，miR165，miR170，miR172，miR390，miR391，miR393，miR394，miR396，miR399，miR535，每个家族拥有一个成员。2．利用miRNA数据库，将草莓中检测到的来自miRNA数据库的21个miRNA家族成员与拟南芥、水稻、毛果杨等9种植物中的miRNA进行了序列比对，结果发现有15个家族在拟南芥中高度保守，分别是miR157，miR159，miR162，miR165，miR166，miR167，miR169，miR171，miR172，miR390，miR391，miR393，miR394，miR396和miR399。除miR157，miR165和miR391以外的12个家族在水稻中同样高度保守，同时miR156，miR170和miR535这3个家族也在水稻中高度保守。miR157，miR159，miR160，miR164，miR166，miR167，miR169，miR170，miR171，miR172，miR390，miR393，miR394，miR396和miR 399等15个家族在毛果杨中高度保守。miR159，miR166，miR167和miR169这4个家族在不同的陆地植物中，从单子叶植物到双子叶植物，甚至到裸子植物都是高度保守的。3．以富集的小于150 bp的小分子RNA为模板，采用3’端加接头、5’端和3’端两端加接头、利用茎环引物等3种RT-PCR策略检测了草莓中保守的miRNA，结果表明，对于15种保守的miRNA，通过3’端加接头方式鉴定出7种；通过两端加接头方式鉴定出1种：而利用茎环的方式鉴定出15种，并且其检测灵敏度很高。同时比较了总核酸、总RNA和小分子RNA等不同种类的模板对利用茎环RT-PCR检测miRNA的影响，结果显示模板性质对茎环RT-PCR的扩增效果没有影响。总核酸的提取是最快速最简单的，因此，以总核酸为模板，利用茎环引物的RT-PCR是定性研究植物中miRNA的最简便快速而有效的方法。而对于定量研究miRNA的表达，以总RNA为模板的茎环RT-PCR是有效的方法。4．采用茎环引物RT-PCR策略，基于TaqMan探针的检测技术，建立了草莓miRNA定量检测的实时RT-PCR技术体系。5．利用miRNA基因芯片，系统研究了草莓中检测到的74个miRNA在草莓传统繁殖苗(CS)和微繁殖原种苗(MS)间的表达差异，4个miRNA显示着明显的差异，分别为miR535、miR390、miR169a和miR169d。其中miR535和miR390上调表达，miR169a和miR169d下调表达，CS／MS分别为2．6884、2．2673、0．2496和0．3814。2个上调表达miRNA(miR535和miR390)的实时定量RT-PCR验证了芯片试验结果。6．利用实时定量RT-PCR技术，在草莓叶片、茎尖、花托和根系4种器官中检测了6种miRNA的差异表达，以草莓叶片中6种miRNA的表达量为1，结果显示miR164在草莓花托中高度表达，达到6．615，明显高于根系(0．485)、茎尖(0．371)和叶片(1．000)；miR172在茎尖和花托中的表达量都较低，分别为0．029和0．020，在根系中的表达量更低，只有0．0008454；miR167在根系中的表达量也很低，只有0．053；miR156，miR159和miR165在4种草莓器官中的表达差异不明显。7．针对miR156、miR172、miR164、miR167、miR159等5种在植物生长发育过程中起重要作用的miRNA，应用实时定量RT-PCR技术，系统比较了‘丰香’和‘全明星’两个品种在离体植株与活体植株以及不同发育时期miRNA的表达差异，结果表明miR156在草莓离体植株中高度表达，达到41．846(‘丰香’)和35．782(‘全明星’)，而在活体植株(MS1)中的表达量仅为0．999(‘丰香’)和1．038(‘全明星’)，表达量降低了30多倍，并且在成年阶段的不同发育时期表达差异不明显。mi172在草莓离体植株中的表达量很低，仅有0．040(‘丰香’)和0．068(‘全明星’)，而在活体植株中(MS1)表达量升高了8倍多，同时在成年阶段的不同发育时期也没有明显的表达量的改变。8．本研究认为组织培养条件诱导miR169表达上调，miR390和miR535可能在微繁殖草莓的表观遗传变异中起着重要作用。