论文部分内容阅读
在体内α-酮酸通过转氨基作用转换为相应的L-氨基酸,提供蛋白质合成的原料,减轻尿毒症毒素水平。α-复方酮酸片为复方制剂,含4种酮代氨基酸钙(KILCa、KILCa、KLCa、KPACa),1种羟代氨基酸钙(HMACa)和5种氨基酸。由于其成分复杂,而且以钙盐形式存在,很难用反相高效液相色谱法进行定量测定,本文将采用离子对色谱法。中空纤维液相微萃取(HF-LPME)作为一种新的样品前处理技术发展迅速,与传统的萃取技术相比,它集采样、萃取和浓缩于一体,结合成本低,设备简单,易与气相色谱法,高效液相色谱法联用等特点。目前,HF-LPME己成功应用于食品、药剂及环境水样的检测中,使传统的样品预处理过程获得极大的简化。但其在离子对色谱中的应用鲜有报道。本论文应用中空纤维液相微萃取结合离子对色谱的方法,对α-复方酮酸片中五种有效成分进行分析检测。本文的主要工作和成果如下:1、建立了一种离子对色谱结合二极管阵列检测器的分析方法,用于同时测定α-复方酮酸片中HMACa、KVCa、KILCa、KLCa和KPACa的含量。流动相为:乙腈-20 mmol/L乙酸铵缓冲溶液(含30 mmol/L正戊胺,pH 7.0)梯度洗脱。该方法的线性范围为20-150 mg/L,其相关系数(r)均大于0.9994,检出限分别为4.8、4.06、2.4、4和1.5 mg/L,样品加标回收率在92.85%到103.2%之间,相对标准偏差(RSD)均小于3.42%。本法操作简便、快速、准确,适用于α-复方酮酸片中5种有效成分的同时测定。2、建立了一种离子对色谱结合蒸发光散射检测器的分析方法,用于同时测定α-复方酮酸片中HMACa、KVCa、KILCa、KLCa和KPACa的含量。以乙腈-20 mmol/L乙酸铵缓冲溶液(含30 mmol/L正戊胺,pH 7.0)为流动相进行梯度洗脱。蒸发光散射检测器漂移管温度为50℃,载气流速为1.0 mL/min。该方法的线性范围为20-150 mg/L,r均大于 0.999,检出限分别为 7.05、16.66、8.00、8.00 和 14.28 mg/L,样品加标回收率在87.45到109.82%之间,RSD均小于3.16%。本法操作简便、快速、准确,适用于α-复方酮酸片及其类似药物中5种有效成分的同时测定。3、建立了一种四丁基氢氧化铵(TBAH)同时作为离子对试剂和中空纤维液相微萃取中的碱性接受试剂的高效液相色谱方法,用于同时测定α-复方酮酸片中HMACa、KVCa、KILCa、KLCa和KPACa的含量。考察了影响萃取效率的因素,确定了最佳萃取条件:中空纤维壁上的有机相为乙酸己酯,供给相pH为1,接受相为6 μL 0.5%TBAH水溶液,在15r/min下萃取30min。以乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钠缓冲溶液(含14mmol/LTBAH,pH7.0)为流动相等度洗脱。该条件下5种物质的富集倍数分别为21,175,285,400和420,其线性范围分别为0.1～10 mg/L和0.5～7 mg/L(HMACa),r均大于0.99,定量下限分别为42.1,8.13,12.3,5和4 u g/L,样品回收率在84到108.83%之间,RSD均小于5.65%。本法快速、准确,样品消耗量少,适用于α-复方酮酸片、工业废水等实际样品中这5种有效成分的测定。