论文部分内容阅读
目的:以肺腺癌A549细胞为研究对象,观察双氢青蒿素与顺铂对该细胞的增殖抑制、周期调控、诱导凋亡和caspase-3活性的影响,并对两药联合的协同作用机制进行了初步的研究,从而为非小细胞肺癌的化疗提供新的思路,同时为以后临床应用奠定理论和实验依据。方法:体外培养肺腺癌A549细胞,选用MTT法分别于24h、48h、72h检测双氢青蒿素、顺铂及两药联合对细胞的增殖影响并用Q值公式评估两药联合的作用效果;用倒置相差显微镜观察各药物处理组作用A549细胞后的形态变化,并用流式细胞仪分析各组对细胞周期及凋亡率的影响;用酶标仪对各组caspase-3的活性变化进行检测。结果:1、双氢青蒿素、顺铂及两药联合对A549细胞均具有增殖抑制作用并呈时间-浓度依赖;相同作用时间下联合用药的增殖抑制作用优于单一用药物,其中两药联合作用24h为单纯相加,48h、72h表现为协同。2、倒置相差显微镜观察发现,双氢青蒿素(30μmol/L)、顺铂(0.625mg/L)处理A549细胞48h后原有梭形细胞形态消失,部分以类圆形代之,较原有细胞体积缩小,胞质浓缩,用高倍镜观察胞膜尚完整,部分核物质固缩、边集,具有凋亡细胞形态学特征。相同作用时间内,联合作用组的凋亡形态较单一药物处理组更为明显。3、流式细胞仪对处理48h的A549细胞检测得出,溶剂对照组(DMSO<0.1%)和正常对照组的细胞周期分布和凋亡率基本相同无明显差(p>0.05);双氢青蒿素(30μmol/L)作用后可出现G0/G1期细胞阻滞(p<0.01);顺铂(0.625mg/L)作用后出现S期细胞阻滞(p<0.01);两药物联合出现G0/G1和S期细胞阻滞(p<0.01)。除此之外,双氢青蒿素、顺铂均能诱导A549细胞凋亡,且同一作用时间两者联合的凋亡率高于单一用药(p<0.01)。4、不同浓度的双氢青蒿素作用A549细胞48h可提高caspase-3的活性,并在一定范围(7.5-60μmol/L)内具有浓度依赖;相同时间作用下顺铂(0.625mg/L)亦可使caspase-3的活化,但与7.5μmol/L双氢青蒿素作用相比,差异无统计学意义(p>0.05);30μmol/L双氢青蒿素与0.625mg/L顺铂联合作用后caspase-3的活化程度较单一用药明显提高(p<0.01)。结论:不同浓度双氢青蒿素、顺铂对肺腺癌A549具有较好的增殖抑制作用,且呈时间-剂量依赖,随着作用时间的延长两药联合的协同效应越为明显,同时联合用药可产生G0/G1、S期细胞阻滞、促进凋亡和提高caspase-3的活化程度。