【研究背景】　　紫外线（ultraviolet，UV）有广泛的生物学效应，不仅可以生成维生素D，同时可以干扰细胞信号转导过程，产生活性氧簇（reactiveoxygenspecies，ROS），与皮肤晒伤、色素沉着、皱纹、光老化和皮肤癌密切相关。UV分为短波紫外线（UVC，100nm﹣280nm），中波紫外线（UVB，280nm﹣320nm），以及长波紫外线（UVA，320nm﹣400nm）。到达地球表面的UVA占95％，能透过真皮，并作用于成纤维细胞，从而引发皮肤光老化。虽然到达地球表面的UVB仅占5%，但UVB致皮肤红斑的能力是UVA的1000倍，能直接损伤DNA从而引起蛋白质变性，进而产生红斑、水疱、脱屑等相应临床症状，因此，UVB也成为了日晒伤等急性光损伤的主要波段。UVB直接损害DNA，导致二聚体形成，并间接通过ROS的形成，导致DNA链断裂和DNA碱基羟基化。ROS作为高攻击性分子，在不同的细胞代谢中产生，例如呼吸链。但UV照射皮肤出现白细胞浸润，这些白细胞也能产生大量的ROS。此外，UV照射皮肤后可以使细胞中的线粒体受损，导致氧化磷酸化功能缺陷和电子传递的功能受损，从而出现过量的ROS。虽然低水平的ROS是生物活动所必需的物质且是细胞内有效的转导信号，但过量的ROS会破坏细胞的大分子物质，包括脱氧核糖核酸、蛋白质和脂质，从而改变细胞的结构和生物学功能，进而导致相应疾病。　　ROS诱导细胞损伤的发病机制参与人类重大疾病的发生，如肿瘤、糖尿病、心血管疾病和神经退行性疾病等。因此，研究与抗氧化应激反应相关的信号通路变得迫在眉睫。而核因子E2相关因子2（Nuclearfactorerythroid2﹣relatedfactor2，Nrf2）信号通路是目前最为重要的一条抗氧化应激信号通路。Nrf2是调节抗氧化应激反应的重要转录因子，Kelch样环氧氯丙烷相关蛋﹣1（Kelch﹣likeech﹣associatedprotein﹣1，Keap1）是其负向调节蛋白。抗氧化反应元件（antioxidantresponseelement，ARE）是位于Ⅱ相解毒酶基因上游启动子区域的一段顺式作用元件，可启动转录调控Ⅱ相解毒酶及抗氧化酶，包括谷胱甘肽﹣S﹣转移酶（glutathione﹣S﹣transferase，GST）、环氧化物水解酶（epoxidehydrolase，EH）、血红素加氧酶﹣1（haemoxygenase﹣1，HO﹣1）、过氧化氢酶（catalase，CAT）基因等的表达，对维持细胞氧化还原状态和防御氧化损伤有重要作用。　　生理状态下，Keap1通过其BTB区结合Cul3、Kelch区结合Nrf2，将Nrf2连接到E3复合体，使泛素从E3转移到Nrf2位于ETGE基序、DLG基序之间的赖氨酸残基上，使Nrf2在胞质内迅速被降解。当UV照射或氧化应激发生时，Keap1上IVR区内半胱氨酸残基上的巯基被修饰，从而改变构像，使得Nrf2与Keap1的亲和力减弱而分离，分离后的Nrf2由细胞质转移至细胞核内，与sMafs蛋白形成异二聚体，识别并结合到5′上游的顺式作用调控序列，即Ⅱ相解毒酶基因启动区的ARE上，启动ARE调控的Ⅱ相解毒酶，加速和调控抗氧化酶基因的转录和表达，从而提高细胞抗氧化应激的能力，维持体内氧化还原平衡。Nrf2信号通路对由过量的ROS导致的相关疾病如神经退行性疾病、肝脏的氧化损伤、糖尿病等都有一定的预防和治疗作用。　　Nrf2激活剂以Nrf2为靶点发挥其抗氧化作用，通过直接或间接激活Nrf2信号通路，诱导抗氧化基因及II相解毒酶的表达和转录，从而提高细胞抗氧化应激的能力。姜黄素能激活Nrf2信号通路并可以诱导II解毒酶如谷胱甘肽等表达量增加，清除细胞内的ROS。在以往的研究报道中，其给药途径多以口服为主，那么外用姜黄素是否也能同样激活Nrf2信号通路，清除体内ROS，降低MDA的生成，减轻UVB造成的脂质过氧化损伤，从而保护细胞避免受到损害达到保护皮肤的作用呢？　　Uncv无毛鼠（hairlessmice）因其皮肤组织结构更接近于人类皮肤，且可以避免由物理剃毛或化学除毛产生的应激损伤，因此，突变无毛鼠是研究皮肤急性光损伤及筛选防晒药物、皮肤抗衰老药物的更为理想、更有价值的动物模型。　　【目的】　　1.测定UVB致Uncv无毛鼠皮肤急性光损伤的最佳剂量，构建UVB致Uncv无毛鼠皮肤急性光损伤的动物模型；　　2.观察UVB照射前后及姜黄素干预前后Nrf2信号通路的变化情况。　　【方法】　　1.首先，根据MED利用不同剂量UVB照射Uncv无毛鼠皮肤，通过观察皮肤外观变化并结合组织病理学改变，确定UVB致Uncv无毛鼠皮肤急性光损伤的最佳剂量，构建UVB致Uncv无毛鼠皮肤急性光损伤的动物模型；　　2.其次，利用免疫组化检测Nrf2核转位的情况；　　3.然后，利用q﹣PCR检测UVB照射前后及姜黄素干预前后Nrf2mRNA的表达情况，利用比色法和ELISA法检测UVB照射前后及姜黄素干预前后MDA、SOD、CAT、GSH﹣Px的变化；　　4.最后，利用紫外线分光光度计测定姜黄素溶液的紫外线吸收光度和透光率。　　【结果】　　1.Uncv无毛鼠背部经UVB照射后24h皮肤出现肉眼可见红斑所需的UVB剂量，即MED，为66﹣180mJ/cm2。经组织病理学检测，UVB照射180s后Uncv无毛鼠皮肤出现急性光损伤，此时UVB剂量为540mJ/cm2；　　2.免疫组化的结果表明：UVB照射180s后，表皮细胞核内有少量的Nrf2蛋白表达；而姜黄素干预后，胞核中Nrf2蛋白的表达量明显增加；　　3.q﹣PCR检测结果显示：姜黄素+UVB组较对照组Uncv无毛鼠皮肤组织Nrf2mRNA的表达明显增加，其调控的II相解毒酶SOD、CAT、GSH﹣Px的水平明显增加，MDA的水平明显降低；　　4.紫外线分光光度计的检测结果显示：姜黄素对UVA和UVB的吸光度和透光率略有差异，而311nmUVB和297nmUVB的吸光度和透光率也有所差异。UVB通过姜黄素的透光率和姜黄素吸收UVB的强度较UVA弱。　　【结论】　　1.UVB致Uncv无毛鼠皮肤急性光损伤模型构建的UVB照射剂量为540mJ/cm2、照射时间为180s；　　2.外用姜黄素后，可有效防御UVB所致的皮肤急性光损伤；　　3.外用姜黄素干预后，Nrf2mRNA的表达量增加，Nrf2从胞质转移至胞核，II相解毒酶SOD、CAT、GSH﹣Px的表达增加，MDA的水平降低，减轻UVB造成的脂质过氧化损伤，防御UVB致Uncv无毛鼠皮肤急性光损伤；　　4.姜黄素具有一定的遮光性和吸光性，可以作为物理防晒剂，防御皮肤急性光损伤的发生；　　5.Nrf2信号通路在姜黄素防御UVB致Uncv无毛鼠皮肤急性光损伤的机制中可能有参与作用。