目的:体外培养大鼠骨髓基质细胞(rat bone marrow stromal cells,rBMSCs),构建携带人牙骨质蛋白(cementum?protein,CEMP)1基因的慢病毒载体并转染rBMSCs,探讨CEMP1基因修饰对rBMSCs生物学行为的影响。方法:1.全骨髓贴壁法体外分离培养rBMSCs,通过成骨和成脂分化能力以及细胞表面标志物检测对rBMSCs进行鉴定;2.构建含人CEMP1基因的重组慢病毒过表达载体,通过RT-PCR及基因测序对重组载体进行鉴定;3.通过荧光显微镜观察转染后细胞荧光表达,流式细胞术检测转染效率,RT-PCR、Real-time PCR、免疫细胞化学和Western Blot检测转染后细胞CEMP1基因和蛋白的表达情况;4.通过检测转染后rBMSCs的成牙骨质相关基因表达,探讨CEMP1基因修饰对rBMSCs的影响。结果:1.成功分离培养rBMSCs;流式细胞术显示细胞高表达CD29和CD90;2.rBMSCs成骨诱导21 d,茜素红染色可见红染的矿化结节;成脂诱导21 d,油红O染色可见红染的空泡样脂滴;3.RT-PCR及基因测序证实成功构建携带人CEMP1基因的慢病毒表达载体;4.转染后rBMSCs在荧光显微镜下可见大量绿色荧光表达,流式细胞术检测结果证实具有较高表达率;5.经RT-PCR、Real-time PCR、免疫细胞化学及Western Blot检测,被转染的细胞高表达CEMP1基因和蛋白;6.Real-time PCR检测结果显示LV-CEMP1-EGFP组细胞BSP、OPN表达较LV-EGFP组和未转染组明显增高,差异具有统计学意义。结论:成功构建携带人CEMP1基因的慢病毒载体并转染BMSCs,CEMP1基因可促进rBMSCs成牙骨质相关基因的表达。