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猪是为人类提供动物蛋白的最主要畜种之一,孟德尔定律的重新发现和数量遗传学的诞生及其在猪育种中的应用,使得猪的常规育种取得了很大成效。而高密度猪基因图谱的建立,以及对猪基因的结构、功能及与性状表型关系等的充分了解,则将是应用分子育种技术对猪重要经济性状进行遗传改良的基础。 本论文根据比较基因定位信息,分离、鉴定和定位猪12号染色体上的新基因,取得了如下结果: 1.依据人17号、小鼠11号染色体上的同源基因保守序列设计CATS引物,从二花脸猪基因组中分离克隆了四个猪中新基因片段,并提交GenBank数据库,这四个基因分别是神经胶质细胞原纤维酸性蛋白(GFAP)基因,GenBank收录号AF250778;铁氧还蛋白还原酶(FDXR)基因,GenBank收录号AF317683;杆细胞磷酸二酯酶γ亚单位(PDEG)基因,GenBank收录号AF317684;蛋白酶体激活亚单位3(PSME3)基因,GenBank收录号AF317685。 2.用猪×啮齿类体细胞杂种板将四个新分离的猪基因进行染色体区域定位,GFAP基因区域定位结果为SSC12p11-(2/3)p13(P=0.8897,与该区域标记间的相关系数为0.9177,P<0.1%),FDXR基因被定位于SSC 12(1/3 p13)-p15(P=0.8989,与该区域标记间的相关系数为0.9250,P<0.1%),PDEG基因位于SSC12(1/3 p13)-p15(P=0.8181,与该区域标记间的相关系数为0.9220,P<0.1%),PSME3基因定位于SSC12p11-(2/3)p13(P=0.8901,与该区域标记间的相关系数为1.000,P<0.1%)。 3.用猪辐射杂种板将四个新分离的猪基因进行染色体精细定位,结果这四个基因均与猪12号染色体上的基因或标记紧密连锁,GFAP基因与GH紧密连锁 (LOD=9.17),FDXR基因与S0143紧密连锁(LOD=12.36),PDEG基因与SW2490紧密连锁(LOD=7.78),PSME3基因与GH紧密连锁(LOD=6.52)。 4.将四个新基因的定位结果与已公布的猪12号染色体RH图谱整合,获得一张猪12号和人17号染色体的同源基因比较定位图,发现这四个新基因在猪12号染色体上的排列顺序是PDEG-FDXR-PSME3-GFAP,而在人17号和小鼠11号染色体上,PSME3和GFAP这两个基因的排列次序是相反的。 5.采用PCR—RFLP分析技术,在不同群体中检测了FDXR的HhaⅠ-RFLP,PDEG的MspⅠ-RFLP多态性,计算了基因型频率和基因频率,分析了各等位基因在不同猪群中的分布差异。并发现了位于PSME3基因第6内含子的HhaⅠ-RFLP和第8外显子的AluⅠ-RFLP多态性位点。华中农业大学博士学位论文 6.在大白x通城,长白,x通城猪的上下代个体中分析了尸ay及、尸刀心G和尸夕团孙基因上述多态性位点的遗传方式,结果表明均呈共显性遗传方式。 7.在群体中检测到只引困孙基因的长度多态性,进一步分析该多态性产生的原因发现是由于第5内含子中存在一段147bp的缺失突变。 8.利用猪EST数据库的信息,以人尺饥伍3基因编码区序列为信息探针,采用电脑克隆策略并结合RT.PCR技术,获得猪只孙刃刃基因的完整编码区序列,推导出相应的氨基酸序列。将所得到的核昔酸序列和推导的氨基酸序列与其它物种相应序列进行同源性比较,结果表明猪尸及团叨基因在核昔酸水平上与人的同源性为%%,而推导的氨基酸序列与人和小鼠的同源性达100%。 9.以荷兰动物科学与卫生研究所Marinus te Pas博士赠送的大白猪群为实验材料,分析了尸凡阴百了基因与部分生产性状的关联,结果发现第8外显子中的Alul-RFLP位点两种基因型AA和AB的170日龄屠宰时的背膘厚有显著差异(P<0.05)。