第一部分大鼠肝卵圆细胞的诱导、分离及鉴定 目的：建立大鼠肝卵圆细胞(hepaticovalcell，HOC)的增殖模型，并探索其分离及鉴定方法。 方法：雄性SD大鼠每天灌喂2-乙酰氨基芴(2-Acetylaminofluroene，2-AAF)，剂量为20mg/kg/d，连续给药4天，第5天行2/3肝切除术，术后继续给药一周，术后11-14天取肝组织标本，行常规组织学及免疫组织化学检查，体外二步胶原酶灌注结合Percoll密度梯度离心法分离大鼠肝卵原细胞，通过流式细胞术(flowcytometry，FCM)对所分离的细胞进行鉴定。 结果：以2-乙酰氨基芴加三分之二肝切除术成功建立了大鼠肝卵圆细胞增殖模型，HE染色汇管区可见大量增殖的小圆细胞，并可向肝实质内延伸，免疫组化证实增生细胞OV-6、c-kit、CK19及AFP染色阳性，而白细胞共同抗原(LCA)染色阴性。以OV-6为第一抗体对所分离的细胞进行流式细胞术检测，所分得的细胞内10％左右为OV6标记阳性的细胞。 结论：2-乙酰氨基芴加三分之二肝切除术可诱导大鼠肝卵圆细胞大量增殖，以二步胶原酶灌注结合Percoll密度梯度离心法分离的细胞群内10％左右为OV6标记阳性的细胞。 第二部分细胞因子TNF-α、IL-6在大鼠肝卵圆细胞增殖过程中的作用 目的：探讨细胞因子TNF-α、IL-6在大鼠肝卵圆细胞增殖过程中的作用。方法：采用2-乙酰氨基芴(2-Acetylaminofluroene，2-AAF)加2/3肝切除建立大鼠肝卵圆细胞介导的肝再生模型，以行2/3肝切除诱导的肝细胞介导的肝再生模型作为对照，采用RT-PCR检测TNF-α、IL-6在模型组及对照组肝组织中的表达情况。 结果：TNF-αmRNA表达水平在模型组及对照组术后均明显上调，模型组持续至术后第3天(P＜0.05)，而对照组持续至术后第6天(P＜0.05)。IL-6mRNA表达水平在对照组术后8h显著升高(P＜0.05)，而模型组术后表达水平无明显变化。 结论：细胞因子TNF-α的高表达可能与大鼠肝卵圆细胞的增殖过程密切相关。 第三部分卵圆细胞在实验性肝癌发生中的作用 目的：探讨卵圆细胞在3-甲基-4-二甲基氨偶氮苯(3-Me-DAB)诱发大鼠肝癌发生、发展过程中的作用。 方法：用化学致癌剂3-Me-DAB诱发SD大鼠肝癌，通过免疫组织化学、RT-PCR、Westernblot技术对大鼠诱癌过程中肝组织内卵圆细胞及P53基因表达的变化进行动态的检测。 结果：诱癌4w，大鼠肝门管区及坏死区内均见大量卵圆细胞，这些细胞呈OV-6染色阳性。诱癌16w，肝组织内可见癌结节形成，癌结节内外均可见有卵圆细胞聚集，部分增生的卵圆细胞p53阳性反应，二者的分布区域基本一致。诱癌20w后大鼠肝癌组织内的p53mRNA、蛋白水平均显著升高(p＜0.05)。 结论：卵圆细胞贯穿了大鼠受化学诱癌剂作用后发生肝癌的全过程，与肝癌的发生有着密切的联系；其机制可能与p53基因的突变有关。