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目的：构建真核表达载体pEGFP-N1/Igf1，Igf1与EGFP融合表达。通过脂质体介导pEGFP-N1/Igf1转染SD大鼠牙囊细胞，分析其对细胞增殖及分化效应的早期影响，为Igf1基因在牙周组织工程修复与再生中的应用提供参考。方法：1.根据SD大鼠Igf1基因在GeneBank中的序列设计引物。巢氏PCR扩增出目的基因，与pMD-19T载体连接构建pMD-19T/Igf1克隆载体。2.应用限制性内切酶EcoR I及Xho I对pMD-19T/Igf1与pEGFP-N1质粒进行双酶切。使用连接酶Solution I连接酶切后的Igf1片段及pEGFP-N1片段。转化大肠杆菌DH5α后进行PCR、酶切、测序等鉴定。3.原代培养SD大鼠牙囊细胞，细胞传至第四代时进行来源鉴定。实验分组：①空白组、②pEGFP-N1/Igf1组、③pEGFP-N1+脂质体组、④pEGFP-N1/Igf1+脂质体组。4.荧光观察：转染后每隔24h在倒置荧光显微镜下观察绿色荧光的表达情况，连续观察96h。5.细胞活力检测（MTT法）：96孔板接种细胞，转染后每隔24h检测各组细胞活力，连续检测8d。6. ALP定量检测（比色法）：24孔板接种细胞，转染后每隔24h收集细胞培养液检测ALP含量，连续检测6d。7.Ⅰ型胶原Col1α1及Col1α2基因表达检测（荧光定量PCR法）：6孔板接种细胞，转染48h后收集细胞。以空白组为参照，计算其它处理组基因的相对表达量。结果：1.经PCR、酶切、测序等鉴定pEGFP-N1/Igf1质粒构建成功。2.绿色荧光观察情况：转染后48h绿色荧光表达量最强。3.细胞增殖活力：转染48h-96h细胞活力均为③④组<①②组（p<0.05）。转染96h时：①组<②组，差异有统计学意义（P<0.05），其余时间点差异无统计学意义（P>0.05）。在转染48h时：③组<④组，差异有统计学意义（P<0.05），其余时间点差异无统计学意义（P>0.05）。4.胞外ALP活性：整体趋势：①④两组较为接近，②组ALP含量在96h内始终高于其它组，在72h时达到最峰，③组ALP含量在96h内始终低于其它组。转染后24h时：②组>①组>④组>③组，差异均有统计学意义（P<0.05）。转染后48h时：②组>④组>①组>③组，除①④两组差异无统计学意义（P=0.7>0.5），其余均差异均有统计学意义（P<0.05）。转染后72h时：②组>④组>①组>③组，除①④两组差异无统计学意义（P=0.908>0.5），其余均差异均有统计学意义（P<0.05）。转染后96h时：②组>①组>④组>③组，差异均有统计学意义（P<0.05）。5. Col1α1及Col1α2基因表达情况（转染后48h）：Col1α1相对表达量:④组>②组>①组>③组；Col1α2相对表达量:④组>②组>①组>③组。结论：1.成功构建Igf1基因C端融合EGFP的真核表达载体：pEGFP-N1/Igf1质粒。2.脂质体Lipofectamine2000介导的转染在转染48h时目的蛋白的表达最强。3.脂质体Lipofectamine2000对SD大鼠牙囊细胞有一定的细胞毒性。pEGFP-N1/Igf1质粒对细胞增殖有促进作用，裸质粒组在转染96h时、脂质体组在转染48h时对细胞的促增殖效应最大。4. pEGFP-N1/Igf1质粒可增强胞外ALP活性，具有一定的促SD大鼠牙囊细胞成骨向分化的作用。脂质体的细胞毒性作用降低了胞外ALP活性，脂质体组pEGFP-N1/Igf1质粒促进ALP表达的效应在48h及72h时较强。5. pEGFP-N1/Igf1质粒在转染48h时可增强SD大鼠牙囊细胞Col1α1及Col1α2基因的表达，具备一定的促细胞成骨分化效应。其效应的高低与转染效率正相关，该效应的时间依赖性尚需继续深入研究。