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沙门氏菌(Salmonella)是常见、重要的人兽共患病原菌，根据沙门氏菌对不同宿主的侵袭能力差异，可以分为广嗜性沙门氏菌和宿主特异型沙门氏菌。鸡白痢沙门氏菌(Salmonella Pullorum)是一种专嗜性的沙门氏菌，可引起雏鸡急性败血症，日龄较大的雏鸡可表现白痢，发病率和致死率相当高，是一种常见多发性、败血性传染病，因此对养禽业产生了极大的危害。
目前，国内外有很多对广嗜性沙门氏菌研究，而对专嗜性的鸡白痢沙门氏菌的研究却很少。本文拟通过比较两者的必需基因，来分析其宿主范围差别较大的原因。本实验以鼠伤寒沙门氏菌中的必需基因为切入点，用插入复制突变(IDM)的方法鉴定其在鸡白痢沙门氏菌中是否必需。
在德国Karin Knuth博士馈赠的质粒pIDM1基础上，通过插入含有XcmI位点的接头序列，获得具有T载体性能的质粒pIDM-T。在Karin Knuth等鉴定出的鼠伤寒沙门氏菌257个必需基因中，我们除去部分有关rRNA、tRNA和未知功能的必需基因以及本实验室袁海霞验证过的27个必需基因，选取剩余的109个必需基因进行鉴定。对选取的109个必需基因参照鼠伤寒沙门氏菌的基因组序列设计引物，以鸡白痢沙门氏菌为模板，扩增对应目的基因的片段，大小在300-700bp之间，将扩增的基因片段分别克隆于pIDM-T中。连接产物化转大肠杆菌TG1感受态中，用PCR和酶切的方法鉴定阳性克隆，将抽提的阳性质粒电转鸡白痢沙门氏菌感受态中，经PCR再次鉴定，成功筛选出108个含鼠伤寒沙门氏菌中的必需基因片段的鸡白痢沙门氏菌克隆，只有一个必需基因yliB以鸡白痢沙门氏菌为模板没有扩增出来。将108个阳性克隆接种于含四环素SOC液体培养基30℃生长增菌30h后进行稀释涂板，计数在30℃和37℃条件下同样菌液量的平板长出的个数，并计算重组率(IPC)，根据IPC值的大小初步推测目的基因在鸡白痢沙门氏菌中的必需性：IPC值小于1.0×10-6时，目的基因为必需基因；IPC值于1.0×10-6和1.0×10-4两者之间，目的基因为疑似必需基因；IPC值于1.0×10-4和1.0×10-2之间时，目的基因为非必需基因。
实验结果如下：以质粒pIDM1为基础，加入XcmI接头，构建完成含T载体性质的pIDM-T，成功筛选出108个含鼠伤寒沙门氏菌的片段的鸡白痢沙门氏菌克隆，并初步鉴定出49个为鸡白痢的必需基因，43个为疑似必需基因，16个为非必需基因。本文通过比较鸡白痢沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌必需基因异同点，了解其代谢调控的差异，为研究两种细菌的宿主差异性提供了一定基础。