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多西他赛(docetaxel，DTX)是由欧洲红豆杉属植物浆果紫杉(Europeanyewtree，Taxusbaccata)的针叶中提取或半合成的第二代紫杉烷类抗肿瘤化合物，其通过阻断微管系统进而阻断有丝分裂期及有丝分裂间期的细胞功能而发挥抗肿瘤作用。多西他赛作为一种高效的细胞毒类药物已广泛用于实体瘤如早期或转移性乳腺癌、非小细胞肺癌、胃癌等的治疗。然而多西他赛也存在较多毒副作用，如会导致中性粒细胞减少、骨骼肌毒性外周神经病变及超敏反应等，这些都影响了其在临床上的应用。原因主要有以下几个方面，一是多西他赛在体内通过非特异性方式分布，无肿瘤靶向性;二是多西他赛为多环结构，在水中难溶，目前临床上应用的上市剂型是含高浓度的非离子型表面活性剂吐温-80和乙醇(50∶50，V/V)的注射剂，但此溶剂体系会引起超敏反应，并且能诱导输液时使用的聚氧乙烯(PVA)袋产生泄露;三是已有报道显示乳腺癌患者对多西他赛存在固有性或获得性多药耐药性，严重降低了药物的疗效。因此，需要选用合适的载药系统以提高多西他赛的溶解度，增加靶向性，降低药物的毒副作用并逆转其多药耐药性。
共聚物胶束作为一种新型的药物载体，是一类由亲水链与疏水链在水溶液中自发排列形成的二嵌段(AB)或三嵌段(BAB)核壳型结构的两亲性聚合物。其疏水片段形成胶束内核，亲水片段形成胶束外壳，内核可以作为疏水性药物的储库增溶药物。由于共聚物胶束在纳米载药体系中的突出优势，近些年来已引起人们的广泛研究，尤其是混合胶束，它可集合多种不同类型单一聚合物胶束的优点，稳定性显著增加。因此，本课题选用了两种无毒、生物可降解并具有逆转药物多药耐药性的共聚物材料，制备了两种混合胶束，增加了多西他赛的溶解度、肿瘤靶向性及进入细胞内的药量。一是载多西他赛的混合胶束;二是细胞穿膜肽TAT介导的载多西他赛的混合胶束，其中TAT可携带载体有效地进入细胞内，从而使得胶束在具有靶向肿瘤部位特定的同时，增加了药物进入细胞内发挥药效的量，以进一步提高治疗效果。论文将对两种混合胶束制剂进行系统的理化性质、体外细胞毒性以及体内药物代谢动力学行为和体内组织分布研究，并对其在肿瘤治疗中的应用前景进行探讨。课题的主要实验方法及结果如下:
1.载多西他赛的MPP/P123混合胶束制剂的研究
本实验选用薄膜分散法制备载多西他赛的混合胶束，在单因素考察的基础上，以星点-效应面法设计并优化实验结果，筛选最优的处方及制备工艺。为增加保存过程中的稳定性，以甘露醇为冻干保护剂，采用冷冻干燥法制备冻于制剂。同时还对胶束制剂冻干前后的理化性质进行了考察，包括胶束的外观形态、粒径及其分布、zeta电势、包封率及载药量。
芘探针法测得混合胶束的CMC为0.0100mg/mL，小于P123的CMC(0.0162mg/mL)。冻干前后，透射电子显微镜观察胶束的均呈球形或类球形，且表面光滑无粘连;动态光散射法测得粒径分别为22.7nm和27.3nm，多分散系数都较小;zeta电势为-5.46mV和-4.65mV，呈现弱的电负性;混合胶束的包封率高达97.25％，载药量为2.3％。
2.TAT介导的载多西他赛混合胶束的研究
首先利用mal-PEG-OH与D，L-丙交酯进行丙交酯开环聚合反应，合成mal-PEG-PLA聚合物，然后与TAT反应制备TAT-PEG-PLA。将生成的产物和MPP、P123以适当的比例制备TAT介导的载有多西他赛的混合胶束（TAT-MM/DTX）。使用透射电子显微镜观察胶束呈球形或类球形;测得平均粒径为30.17nm，粒径分布较窄;Zeta电势为5.84±0.55mV。体外释放实验中，本实验分别模拟正常血液及肿瘤部位的pH值，选用pH7.4和pH5.0的缓冲液为释放介质，研究制剂的释放速率。结果显示MM/DTX及TAT-MM/DTX两种混合胶束制剂的体外释放曲线相似，并且与多帕菲(R)相比，混合胶束制剂有明显的缓释作用。在pH5.0条件下两种胶束制剂的释放速率快于pH7.4时的释放速率，由此可知，药物从胶束制剂中释放显示了一定的pH依赖性。
3.混合胶束体外抗肿瘤评价
本实验采用MTT法研究了多帕菲(R)、MM、TAT-MM胶束对人乳腺癌细胞(MCF-7)、多药耐药的人乳腺癌细胞(MCF-7/MDR)及人肝癌细胞(HepG2)的细胞毒性作用。与多帕菲(R)相比，两种胶束制剂的抗肿瘤能力明显增强，抗肿瘤活性为TAT-MM/DTX胶束＞MM/DTX胶束＞多帕菲(R);多西他赛原料药、多帕菲(R)、MM/DTX及TAT-MM/DTX的半数抑制浓度分别为，MCF-7:5.56±0.51、1.94±0.17、0.7973±0.08、0.444±0.03μg/mL;HepG-2:10.29±0.62、4.82±0.39、1.91±0.15、0.61±0.05μg/mL;MCF-7/MDR:58.13±3.92、36.37±2.67、5.50±0.42、1.98±0.11μg/mL。流式细胞实验结果显示，三种细胞对TAT-MM胶束的摄取量明显高于MM。
4.混合胶束给药系统的体内研究
兔子静脉注射多帕菲(R)及MM/DTX、TAT-MM/DTX胶束三种制剂后，以DAS2.0软件分析各个时间点血药浓度结果显示，三种制剂在兔子体内均符合二室模型，药动学方程分别为c=86628e-44.6t+5843e-1.57t，c=12349e-10.95t+4150e-0.558t，c=6542e-7.91t+4150e-0.478t，与多帕菲(R)的ACU(8064ng/L/h)相比，MM/DTX、TAT-MM/DTX两种胶束制剂的ACU(16604ng/L/h、13815ng/L/h)明显增大;同时两种胶束制剂的MRT(9.754h、6.81h)均大于多帕菲(R)的MRT(2.454h)。因此，由实验可知，与多帕菲(R)相比，静脉注射给药后，MM/DTX、TAT-MM/DTX两种胶束制剂均能延长药物在体内的滞留时间，具有缓释的作用。
动物体内的组织分布通过裸鼠体内活体成像实验测定，结果表明，通过裸鼠尾静脉注射给予MM/DiR、TAT-MM/DiR胶束后，制剂均可快速分布到肿瘤部位，且随着时间的延长，肝脏处的荧光强度逐渐减弱，肿瘤部位的荧光强度逐渐增强，说明药物蓄积在肝脏形成的药物储库，缓慢释放出来，并浓集于肿瘤部位。因此，MM/DTX、TAT-MM/DTX两种胶束制剂有明显的肿瘤靶向性，可极大地降低药物对正常组织器官的毒性，在肿瘤疾病的治疗中有重要临床意义。
综上所述，本课题制备的多西他赛混合胶束制备工艺简单，重现性及稳定性良好，大大提高了多西他赛的溶解度，并可被动靶向于肿瘤组织，同时可显著提高进入细胞内的药量，降低了毒副作用并提高了抑瘤效果，为进一步开发安全、有效的抗肿瘤制剂提供了新的思路。