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福建境内有野生兰78属170种以上,大多种类的野生资源稀少,分布区域狭窄、生境特殊。密花鸢尾兰(Oberonia seidenfadenii)和小毛兰(Conchidium sinicum)均为近些年来在福建境内发现的新记录种,为附生野生兰,前者已知分布点极少,后者株型矮小、生境特别,均能正常开花,但结实低。植株矮小,花更小,造成其分类归属问题存在争议。另外,随着山区旅游业的开发及药用价值的挖掘,其野生资源和生境不断遭到破坏,种群数量锐减。因此,保护密花鸢尾兰和小毛兰的野生种质资源刻不容缓。为明确其分类地位和提出有效保护方案,本文通过ITS、ISSR分析法和组织培养等方法对密花鸢尾兰和小毛兰的分类归属、居群遗传多样性、无菌萌发及分化增殖等方面开展研究,主要研究结果如下:(1)基于ITS序列建立的系统发育树,支持将套叶兰属(Hippeophyllu Schltr.)并入鸢尾兰属(Oberonia Lindl.)。采自永泰产的密花鸢尾兰与其他产地(NCBI库中)ITS序列一致,支持Flora of China(FOC)对该种分类地位归属处理。支持将原毛兰属(Eria Lindl.)的小毛兰(Eria sinica)和对茎毛兰(Eria pusilla)归入新属蛤兰属(Conchidium Griff.)中,但应作两个种处理,建议维持《中国植物志》两个种的观点,即小毛兰(Conchidium sinicum)和蛤兰(Conchidium pusilla),不支持Flora of China(FOC)将“小毛兰并入蛤兰”的处理,以及Yan Peng Ng等人将小毛兰归入盾柄兰属(Porpax Lindl.)的做法。(2)建立了密花鸢尾兰ISSR-PCR最佳反应体系和扩增程序,筛选出12条引物对21个样品进行扩增,得到153条谱带,其中多态性条带有139条,多态性位点百分率(PPF)为90.85%。将形成的矩阵用Popgene1.31与NTsys2.10e软件分析表明,21个密花鸢尾兰样品个体两两间的遗传距离在0.0000~3.1781之间,福建与浙江两个密花鸢尾兰居群遗传多样性存在差异,其中福建永泰的居群遗传多样性为:NPF=130,PPF=85.53%,Na=0.3530,Ne=0.3477,Nei=0.1750,I=0.2366;浙江宁海和奉化的居群遗传多样性为:NPF=79,PPF=51.97%,Na=0.5013,Ne=0.3943,Nei=0.2100,I=0.2997。21个密花鸢尾兰样品非加权平均距离法(UPGMA)图在遗传距离为0.560时分为两支,即福建与浙江2居群分支点,地理位置相近的种间居群基本聚在一起,反映出其种间亲缘关系较近。(3)建立了小毛兰ISSR-PCR最佳反应体系和扩增程序,筛选出13条引物对23个样品进行扩增,得到144条谱带,其中多态性条带有133条,平均每个引物得到11.08条,多态性条带10.23条,多态性位点百分率为92.33%。福建省内的小毛兰居群遗传多样性存在差异,7个小毛兰的居群多态位点数(NPF)在34~81,多态位点百分率(PPF)在23.61%~56.25%,等位基因数(Na)在0.4262~0.5005,有效等位基因数(Ne)在0.3289~0.4104,Nei基因多样性在0.1807~0.2131,Shannon信息多样性指数(I)在0.2591~0.3023。南靖(NJ)居群各项遗传多样性参数指标(PPF=53.47%,I=0.3023)最大,而云霄(YX)居群的各项遗传多样性参数指标(PPF=23.61%,I=0.2591)最小,表明南靖居群的遗传多样性最丰富,云霄居群的遗传多样性最低。23个小毛兰样品两两间的遗传距离在0.1268~0.6171间,7个小毛兰居群的遗传距离在0.1188~0.3051之间,遗传一致度在0.7370~0.8880之间,非加权平均距离法(UPGMA)图当遗传一致度为0.650时,23个小毛兰样品划分为两支,当遗传一致度为0.658时,分为三支,其中长乐CL居群单独为一支。聚类分析结果表明,亲缘关系密切的小毛兰居群,其在地理位置上也很接近。(4)在密花鸢尾兰无菌萌发的正交试验中,各因素对种子萌发率的单因素影响顺序依次为奈乙酸(NAA)>基本培养基类型>有机添加物,最适的无菌萌发培养基配方为:1/2MS+30.0 g/L蔗糖+8.0 g/L琼脂+100 ml/L香蕉汁+0.1 mg/L NAA,p H=5.8±0.1,萌发率达90%;原球茎增殖发育最适宜培养基配方为:1/2MS+30.0 g/L蔗糖+7.0 g/L琼脂+100 ml/L土豆汁+0.1 mg/L NAA,p H=5.8±0.1。在小毛兰无菌萌发的正交试验中,各因素对种子萌发率的单因素影响顺序依次为活性炭>6-BA>NAA,最适无菌萌发的培养基配方为:1/2Ms+20.0 g/L蔗糖+7.0g/L琼脂+100 ml/L椰乳+1.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/L NAA+1.0 g/L活性炭,p H=5.3±0.1,萌发率达93%。研究结果表明,密花鸢尾兰居群水平遗传多样性较高,说明其具有较强的环境适应能力,建议对密花鸢尾兰居群实施就地保护,并积极开展人工扩繁,生产种苗,在相近的环境中仿生种植以扩大其分布范围,促进基因交流。小毛兰居群水平遗传多样性较低,说明其环境适应能力较弱。目前,小毛兰虽不面临濒危境地,但生境极易受人为破坏,应引起重视。人工快繁不易,保护原生境,就地保护是最佳保护对策。此外,密花鸢尾兰已知分布点尚有台湾、广东和广西等省;小毛兰已知分布点亦有浙江、广东、广西、云南、湖南、贵州等省。在今后全面普查中福建省这两种其他分布点的发现;有必要扩大分布区、增加样本数量,再行更具说服力的种群遗传多样性分析;以及小毛兰原球茎增殖发育最适宜培养配方等方面,均有待下一步研究。