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在医学技术高度发达的今天癌症仍然严重威胁着人类的健康和生命。以药物载体作为运输工具进行的药物治疗是目前最有希望的治疗方式。本课题构建透明质酸修饰载中药多成分的纳米脂质载体系统,首先采用纳米脂质载体包载人参中三种难溶性有效成分齐墩果酸、熊果酸、人参皂Rg3;然后采用透明质酸作为靶向因子,经电荷吸附作用对纳米脂质载体进行修饰,实现主动靶向肿瘤的目的、延长体内滞留时间。探讨经透明质酸修饰的中药多成分纳米递药系统包封和释放规律,通过体内、体外研究以期达到肿瘤细胞内给药目的。1.OUR-NLC工艺与处方优化以纳米粒的粒径、Zeta电位,PDI,包封率和载药量等为评价指标,采用单因素考察法与星点设计-效应面法相结合进行工艺与处方优化。优化结果表明,以NLC为载体材料,CTAB为表面活性剂,采用溶剂超声分散法制备的OUR-NLC外观呈现淡蓝色乳光,总包封率及总载药量分别为(45.67± 1.14)%和(8.76±0.95)%。2.HA-OUR-NLC制备及工艺优化采用电荷吸附法制备HA-OUR-NLC。透明质酸含有羧基荷负电,OUR-NLC荷正电,采用电荷吸附法使HA吸附在OUR-NLC表面,获得主动靶向纳米脂质载体。考察处方及工艺影响因素。确定最优处方为:HA浓度0.5mg/mL,HA与NLC的质量比为3:1,滴加速度为1mL/min,搅拌速度为30r/min。采用比较实验法进行冻干工艺研究,结果显示,浓度为5%的甘露醉作为冻于保护剂的HA-OUR-NLC冻干粉外观呈疏松的白色粉木,复溶性良好。三批验证产品显示,重现性较好,工艺可行。3.HA-OUR-NLC特性研究采用透射电镜观察HA-OUR-NLC的形态,ZetasizerNano-ZS90激光粒度分析仪测定纳米粒粒径、PDI及Zeta电位。结果显示,HA-OUR-NLC形态圆整,分布均匀,粒径及 PDI 值分别为 165.15±3.84nm 和 0.227±0.01,Zeta 电位为-22.87±0.97mV。采用动态透析法,以pH7.4的PBS为释药介质,37℃恒温避光恒速搅拌下进行HA-OUR-NLC的体外释药实验。结果显示,HA-OUR-NLC体外释药曲线符合Higuchi方程,拟合系数R~2分别为0.976,0.985和0.988,证明HA-OUR-NLC有一定的缓释作用。通过释药动力学的研究可知,HA-OUR-NLC中三成分的释放存在差异,分子量小、体积小的苷元比分子量大、体积大的皂苷释放的快,在同一时间点,OA和UA的累积释放量大于Rg3。4.HA-OUR-NLC药动学研究以OUR溶液为对照组,研究HA-OUR-NLC的药动学参数,在设计的时间点大鼠眼眶取血,HPLC法测定OA,UA和Rg3的血药浓度,用DAS2.0软件进行处理数据,拟合药动学参数。结果表明,对照组与纳米粒组的药时过程均符合二室模型动力学特征。结果表明,HA-OUR-NLC改变了其药物代谢动力学参数,三个成分纳米化后能够显著延长药物在大鼠体内的半衰期和体内滞留时间,清除率明显降低,使AUC值增大,对肝脏的作用时间延长,提高了药物的生物利用度,发挥了长效作用。5.HA-OUR-NLC靶向性研究荷瘤小鼠体内分布研究。以雌性BALB/C-nu纯系裸鼠为实验动物,通过尾静脉注射途径给药,采用高效液相色谱法测定小鼠体内药物的含量,以OUR溶液为对照,研究了 HA-OUR-NLC在荷瘤小鼠体内的分布情况,以药物的相对靶向率(RTE)和相对摄取率(RUE)评价载药纳米粒给药后小鼠体内分布情况。实验表明,OUR-NLC和HA-OUR-NLC组比较说明,NLC经HA修饰后肿瘤的靶向性更明显,且肝肾的含药量略有降低,换言之同时降低了肝肾的毒性。给予HA-OUR-NLC后,NLC经体循环快速富集于肿瘤和肝脏,而在血液和其他组织中分布较少,HA-OUR-NLC组在肿瘤的药物蓄积增加,推断HA可能与肿瘤细胞表面受体CD44特异性结合,介导药物转运入胞,从而增加了药物在肿廇的蓄积。基于FIVE技术的肿瘤靶向性研究。小鼠尾静脉注射FITC标记的HA-OUR-NLC溶液和FITC溶液,采用荧光内窥式激光共聚焦成像系统,对小鼠活体内实时细胞水平观测,探讨纳米粒能否进入肿瘤细胞内。结果表明,FITC溶液组没有荧光,排除FITC的干扰。对于FITC标记的HA-OUR-NLC组,随着时间的延长,纳米粒由细胞外逐渐进入到细胞内部,数量亦逐渐增加,具有正相关性。因此,HA-OUR-NLC是可以靶向肿瘤细胞内的。基于活体成像技术的肿瘤靶向性研究。小鼠尾静脉注射生理盐水溶液和DiR标记的HA-OUR-NLC溶液,采用小动物活体成像系统,定位追踪药物在靶器官的实时分布情况并成像。结果表明,生理盐水组无荧光,DiR-HA-OUR-NLC组肿瘤部位的荧光亮度均明显强于DiR-OUR-NLC组。两组NLC均于3h在肿瘤部位的蓄积量最大,DiR-HA-OUR-NLC组从3 h后蓄积量呈递减趋势,12 h后各组织中的的荧光强度微弱。6.HA-OUR-NLC药效学研究以SMMC-7721荷瘤小鼠为模型,评估了不同制剂在给药后的抑瘤率结果显示,除空白对照组肿瘤生长迅速之外,其余组均对肿瘤有抑制作用,抑制效果从弱到强分别为OUR溶液组、OUR-NLC组、阳性对照组、HA-OUR-NLC组。对荷瘤小鼠的肿瘤组织进行HE染色,考察结果显示,经HA-OUR-NLC治疗后,细胞体积变小,细胞核深染,染色质浓缩,呈现出典型凋亡形态学改变。证明HA-OUR-NLC对肿瘤的生长有明显的抑制作用。对荷瘤鼠的肿瘤组织微血管密度考察结果显示,经HA-OUR-NLC治疗后肿瘤组织中微血管数量明显下降,证明经修饰后的纳米脂质载体充分发挥了对肿瘤组织微血管生成的抑制作用。7.HA-OUR-NLC细胞毒性研究采用MTT法考察HA-OUR-NLC对SMMC-7721细胞的毒性。结果表明,OUR溶液组、OUR-NLC组和HA-OUR-NLC组对SMMC-7721细胞增殖均具有抑制作用,并随药物浓度的增加抑制率增大;相同浓度时,各组药物作用于SMMC-7721细胞的抑制率随时间延长而上升;OUR溶液组与OUR-NLC组、HA-OUR-NLC组相比抑制率稍有下降,但对细胞仍有杀伤作用;OUR-NLC组与HA-OUR-NLC组相比抑制率稍有下降,表明HA-OUR-NLC组对细胞抑制效果更好;24h纳米粒组抑制率均较低,48h以后抑制率逐渐升高达到游离药物的抑制水平,表明HA-OUR-NLC组有明显的缓释效应。综上,本课题所制备的HA-OUR-NLC稳定性好,具有肿瘤主动靶向作用,体外药效学、体内药效学结果均显示HA-OUR-NLC具有明显的抑瘤效果,因此,本课题制备的HA-OUR-NLC具有肿瘤主动靶向的优势,本文为难溶性的中药多成分纳米递药系统的研究提供了方法和技术。