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第一部分细胞松弛素B在体外成熟卵母细胞玻璃化冷冻中的作用目的探讨细胞松弛素B在人类体外成熟卵子玻璃化冷冻中的作用,是否可以提高临床冷冻效果。方法收集常规胞浆内单精子显微注射-胚胎移植(ICSI-ET)周期中未成熟卵母细胞395枚(包括生发泡期即GV期和第一次减数分裂中期即MⅠ期),在体外培养24h～48h,269枚卵母细胞成熟(排出第二极体),随机分成四组并行玻璃化冷冻。A组(66枚)用细胞松弛素B(CCB)预处理20min后行玻璃化冷冻;B组(68枚)用CCB预处理30min后行玻璃化冷冻,C组(63枚)用CCB预处理40min,D组(72枚)未经CCB处理直接行玻璃化冷冻,E组对照组30枚体内成熟卵子未用CCB处理直接玻璃化冷冻。各组卵子冷冻三周后解冻,复苏的卵子行ICSI辅助受精,观察各组成活率、受精率、卵裂率及囊胚形成率。结果冻融后的体外成熟卵子,其成活率、受精率、卵裂率及囊胚形成率均显著低于体内成熟卵子。A、B、C、D四组间的成活率、受精率、卵裂率无显著性差异(P>0.05),A组和D组各有1枚囊胚形成,B、C组未获囊胚,E组获囊胚5枚。结论(1)体外成熟卵子冻融后,成活率、受精率、卵裂率均下降,囊胚形成率低,胚胎后期发育潜能显著降低。(2)CCB预处理未能提高卵子冷冻的成活率、受精率、卵裂率及胚胎的发育潜能。第二部分细胞松弛素B预处理人体内成熟卵母细胞行玻璃化冻融后纺锤体与染色体的变化研究目的探讨细胞松弛素B(CCB)预处理后进行人体内成熟卵母细胞玻璃化冷冻,了解处理后其纺锤体及染色体在冻融过程中能否得到有效保护,从而改善人卵母细胞玻璃化冷冻效果。方法收集常规IVF-ET或ICSI-ET周期中成熟卵母细胞71枚,随机分成4组行玻璃化冷冻。A组(17枚)用CCB预处理20mins后行玻璃化冷冻,B组(20枚)用CCB预处理30mins,C组(17枚)用CCB预处理40mins,D组(17枚)未用CCB处理直接玻璃化冷冻。冻存三周后融冻卵母细胞,复苏的卵母细胞行荧光染色固定,在共聚焦显微镜下观察各组卵母细胞纺锤体及染色体形态结构,评估玻璃化冷冻人成熟卵母细胞效果。结果A、B、C、D四组之间的复苏率(70.59%,64.71%,50.00%和64.71%)无显著差异( P>0.05 ), A、B、C、D四组之间的纺锤体及染色体正常形态率(27.27%,30.00%,45.46%及33.33%)亦无显著差异(P>0.05)。结论(1)冷冻使成熟卵母细胞纺锤体及染色体的正常形态结构受到一定程度的破坏。(2)CCB并不能保护卵母细胞纺锤体及染色体在冻融过程中的损伤。第三部分细胞松弛素B预处理人体外成熟卵母细胞行玻璃化冻融后纺锤体与染色体的变化研究目的探讨用细胞松弛素B(CCB)预处理人体外成熟卵母细胞后行玻璃化冷冻,了解在冻融过程中纺锤体及染色体形态结构能否得到有效保护,以改善卵子玻璃化冷冻效果。方法收集常规胞浆内单精子显微注射-胚胎移植(ICSI-ET)周期中废弃的未成熟卵母细胞(包括GV期和MⅠ期),在体外培养24h～48h,共获得170枚成熟卵母细胞(排出第一极体),随机分成5组,其中4组行玻璃化冷冻,1组未作冷冻作为对照。A组(37枚)用细胞松弛素B(CCB)预处理20mins后行玻璃化冷冻;B组(38枚)用CCB预处理30mins;C组(33枚)用CCB预处理40mins;D组(36枚)未用CCB处理直接玻璃化冷冻;E组(26枚)设为对照组未经CCB处理和冷冻。卵子冷冻三周后解冻,复苏的卵子行荧光染色固定,在共聚焦显微镜下观察各组卵母细胞纺锤体及染色体形态。结果A、B、C、D四组之间的复苏率(80.39%,64.86%,55.36%和78.79%)无显著差异(P>0.05);A、B、C、D四组纺锤体及染色体正常形态率(21.05%,26.30%,27.78%及23.81%)显著低于E组(61.54%)(P<0.05),A、B、C、D四组间纺锤体及染色体正常形态率无显著差异(P>0.05)。结论冷冻使体外成熟卵母细胞纺锤体及染色体的正常形态结构受到一定程度的破坏,其损伤程度并不能因为CCB的预处理而得到改善。