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本研究采用基因克隆、细胞培养、细胞免疫和荧光定量RT-PCR等技术,建立PRRSV感染外周血单核细胞来源的巨噬细胞模型,评价江苏省地方猪种(梅山猪、二花脸、苏钟猪和姜曲海猪)PRRSV的易感性,研究细胞因子IL-8、IL-10和TNF-α与猪PRRSV易感性的关联,为PRRSV抗性猪的育种提供理论依据,促进我国地方猪种的种质资源的挖掘和利用。1 PRRSV感染外周血单核细胞来源的巨噬细胞(MDMs)模型的建立将通过回归验证的毒株PRRSV NJGC接种于PAMs和MDMs细胞,采用荧光定量PCR方法检测PRRSV在两种细胞中的复制情况,同时测定细胞上清液的病毒滴度。结果表明,PRRSV体外感染PAMs和MDMs细胞12 h细胞中病毒载量达到最高值,随后迅速下降;细胞上清液病毒滴度在12～24h进入平台期,然后转入衰亡期。说明PRRSV在PAMs和MDMs中生长趋势相同,从而证明外周血单核细胞来源的巨噬细胞感染PRRSV模型的可行性,为研究PRRSV在不同猪种的易感性奠定了基础。2江苏省地方猪种PRRSV易感性的评价采用荧光定量PCR方法检测不同品种MDMs在不同时间点中PRRSV的复制情况,同时测定细胞上清液在不同时间点的病毒滴度,以比较不同猪种PRRSV易感性差异。结果表明,PRRSV在不同品种猪MDMs复制的趋势相同,均在12h病毒载量达到高峰,12～18 h迅速下降。各品种猪MDMs上清中病毒滴度变化趋势相似,在12～24h同时进入平台期,然后转入衰亡期。病毒接种12h时病毒载量:梅山猪>二花脸>苏钟猪>姜曲海,并且二花脸的载毒量显著高于姜曲海(P<0.01),在12h的上清滴度姜曲海小于梅山猪和苏钟猪,以上可知姜曲海是PRRSV相对低易感品种,而梅山猪和二花脸为相对高易感品种。3 MDMs感染PRRSV后细胞因子的表达及与PRRSV易感性的关联采用荧光定量PCR技术检测不同时间点MDMs中IL-8、TNF-α和IL-10mRNA表达情况。结果表明,作为低易感品种姜曲海MDMs在接种PRRSV前后IL-8 mRNA表达量显著高于其余三组(P<0.05),并在12 h表达量达到峰值;苏钟猪MDMs在接种PRRSV前和接种后24 h,IL-8 mRNA量极显著高于二花脸和梅山猪(P<0.01)。这些表明PRRSV能够诱导IL-8的表达,并且高表达IL-8可能抑制PRRSV在MDMs中复制。梅山猪、苏钟猪和姜曲海MDMs在接种PRRSV 0～6 h TNF-α表达量下降,6～12 h表达量上升,作为低易感品种姜曲海TNF-α表达量在整个时间段均处于较高水平。四个品种猪MDMs在接入PRRSV后IL-10表达量均在0～6 h下降,然后上升。其中,在6～36h姜曲海MDMsIL-10表达量显著高于二花脸组(P<0.05)。作为低易感品种姜曲海MDMs TNF-α和IL-10表达量均处于较高水平,推测这两种细胞因子能够影响PRRSV在MDMs中的复制。综上所述,本试验建立了猪外周血单核细胞来源的巨噬细胞感染PRRSV的模型,确定病毒接种MDMs 12 h的病毒量作为猪PRRSV易感性的评价指标,并以此评价江苏省地方猪种PRRSV的易感性和细胞因子表达的检测。姜曲海为PRRSV相对低易感品种,而梅山猪和二花脸为相对高易感品种,姜曲海猪IL-8、IL-10和TNF-α表达量高于二花脸和梅山猪,为PRRSV抗性猪的育种奠定了基础。