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研究目的:探讨HSDL2蛋白在乳腺癌中的表达情况,并分析HSDL2高表达与乳腺癌患者临床病理特征和预后的相关性;揭示HSDL2蛋白在乳腺癌细胞增殖和细胞周期进程中的作用,并初步阐明HSDL2调控乳腺癌恶性演进的相关分子机制,为乳腺癌临床治疗提供预后标志物和潜在分子靶点。材料与方法:1.数据库及乳腺癌组织标本分析:运用Oncomine数据库检索乳腺癌组织中HSDL2 mRNA的表达水平;通过免疫组织化学染色法检测HSDL2蛋白在119例乳腺癌组织和40例正常乳腺组织中的表达情况,并分析其表达与乳腺癌患者临床病理特征之间的关系;采用Kaplan-Meier plotter数据库、Human Protein Atlas数据库和Cox 比例风险模型分析HSDL2的表达在乳腺癌患者临床预后评估中的意义。2.体外实验:采用蛋白免疫印迹实验检测HSDL2蛋白在多种人乳腺癌细胞系中的表达情况,应用小干扰RNA(siRNA)技术沉默MDA-MB-231和MDA-MB-468细胞中的HSDL2基因的表达,并通过蛋白免疫印迹实验验证其沉默效果。免疫荧光实验检测HSDL2蛋白在乳腺癌细胞中的定位;应用噻唑蓝(Methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)实验和平板克隆形成实验检测HSDL2基因沉默对细胞增殖能力的影响;流式细胞术检测HSDL2基因沉默对细胞周期进程的影响;蛋白免疫印迹实验检测HSDL2基因沉默对PI3K/AKT信号通路及细胞周期相关蛋白的影响。结果:1.HSDL2蛋白在乳腺癌组织中高表达,并与乳腺癌患者的分化程度和临床分期密切相关:Oncomine数据库检索发现HSDL2在乳腺癌组织中的mRNA表达显著高于正常乳腺组织(P=0.01);免疫荧光结果显示,HSDL2蛋白主要定位于乳腺癌细胞的细胞质中;免疫组化统计结果显示:HSDL2蛋白在乳腺癌组织中的阳性率为87.4%(104/119),显著高于正常乳腺组织(25%,10/40)(P<0.01),强阳性率为48.7%(58/119),显著高于正常乳腺组织(12.5%,5/40)(P<0.01)。进一步分析HSDL2蛋白高表达与乳腺癌患者临床病理特征的相关性发现,HSDL2蛋白高表达与乳腺癌患者的分化程度和临床分期密切相关(P<0.05),与年龄、淋巴结转移和HER2等因素无明显相关性。2.HSDL2蛋白高表达是乳腺癌患者不良预后的独立风险因素:KM plotter和Protein Atlas数据库分析显示,HSDL2 mRNA高表达患者的生存期明显短于HSDL2 mRNA低表达的患者(P<0.05)。Kaplan-Meier生存分析结果显示,HSDL2蛋白高表达的乳腺癌患者总生存期明显短于HSDL2蛋白低表达的患者(P<0.05)。对于PR(-)乳腺癌患者,HSDL2蛋白低表达的乳腺癌患者总生存期明显高于HSDL2蛋白高表达的患者(P<0.05),但对于PR(+)乳腺癌患者总生存期无明显相关性。单因素Cox回归模型分析结果显示,临床分期、雌激素受体、孕激素受体和HSDL2蛋白表达水平与乳腺癌患者的不良预后密切相关(P值均<0.05),进一步多因素Cox回归模型结果显示,HSDL2蛋白的表达水平、临床分期和孕激素受体的表达均是乳腺癌患者不良预后的独立风险因素(P<0.05)。3.HSDL2通过调控细胞周期分布影响乳腺癌细胞的增殖:MTT实验结果表明,与对照组相比,沉默HSDL2可以有效降低乳腺癌细胞的细胞活性(P<0.01);通过平板克隆形成实验发现,下调HSDL2表达可显著抑制乳腺癌细胞的集落形成能力(P<0.01)。PI单染结果表明,沉默HSDL2可诱导乳腺癌细胞阻滞于G0/G1期,使G2/M期细胞分布减少。蛋白免疫印迹实验结果显示,沉默HSDL2可明显下调细胞周期蛋白依赖性激酶1(CDK1)、细胞周期蛋白B1(Cyclin B1)和细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)的表达水平,上调细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂P21(P<0.01),P53的表达无明显变化。4.HSDL2沉默可影响PI3K/AKT信号通路的激活:蛋白免疫印迹实验结果显示,沉默HSDL2可抑制PI3K/AKT信号通路的激活,下调p-AktSer473、p-S6KThr389等标志物的表达(P<0.01),而AKT、S6的表达未发生明显变化。结论:1.HSDL2蛋白在乳腺癌组织中高表达,且其高表达与乳腺癌患者的分化程度、临床分期和生存期密切相关;2.HSDL2蛋白高表达是乳腺癌患者不良预后的独立风险因素;3.沉默HSDL2蛋白表达可有效抑制乳腺癌细胞增殖,诱导细胞周期阻滞,抑制PI3K/AKT信号通路的激活。