3种富EPA海洋微藻的诱变育种

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为了获得高产EPA的海洋微藻良种,本文以微绿球藻(Nannochloropsisoculata)、三角褐指藻(Phaeodactylum tricornutum)、新月菱形藻(Nitzschiaclosterium)为材料,研究了紫外诱变和NTG诱变对微藻的生长、总脂和脂肪酸的影响,筛选出优良藻株,并对其进行生长、总脂和EPA的培养条件优化。主要结果如下:3种藻经紫外辐射处理后,藻细胞的生长速率发生了不同程度的改变,从中得到7株比出发株生长更快的诱变株。从生长速率、总脂含量和EPA含量综合考虑,三角褐指藻的诱变株MP-2的改良较成功,其生长速率为(0.503±0.021),是出发株的1.12倍,总脂含量增加了23%,EPA含量也有所提高。三角褐指藻诱变株MP-2的最适生长温度为20℃,30℃为该藻的温度阈值。该藻在20℃下总脂含量最高。15℃下EPA和PUFA含量最高,10℃下DHA含量最高。诱变株MP-2在20~120μmol/(m2·s)的光照范围内,光强为40μmol/(m2·s)生物量最大。低光照有利于该藻总脂的积累,在20和40μmol/(m2·s)光照条件下总脂含量最高。高光强有利于该藻EPA和DHA的积累,在100μmol/(m2·s)光照强度下,该藻细胞中EPA和DHA的含量均达到最高。诱变株MP-2在盐度25时,生长速率最高(0.447±0.013),在盐度30和35下,该藻总脂含量显著高于其它组,分别达到(36.66±1.07)%和(36.54±1.32)%。盐度25时DHA含量最高。诱变株MP-2在氮浓度为20mg/L生长速率最大;在氮浓度30mg/L时藻的总脂含量最大。氮浓度达到25mg/L,PUFA和EPA含量达到最大。诱变株MP-2在磷浓度2.5mg/L时生长速率最大;低磷利于该藻总脂的积累,磷浓度1.0mg/L时,总脂含量最高。磷浓度2.5mg/L,该藻EPA和PUFA含量显著高于其它组。诱变株MP-2的适宜铁源是FeSO4,铁浓度为5.0mg/L时生长速率最大。该藻的最佳产脂铁浓度为2.5mg/L,铁浓度10.0mg/L时,EPA和PUFA的含量均达到最大;缺铁或低铁条件下,该藻中EPA和DHA的含量为极低,甚至检测不到,PUFA的含量也极低。该藻无法以葡萄糖、乙酸钠和甘油为碳源进行异养培养。从生产角度而言,该藻培养在20℃,光照强度40μmol/(m2·s),盐度25,以20mg/L的KNO3为氮源,2.5mg/L的KH2PO4为磷源,2.5mg/L的FeSO4为铁源可以获得高最产量的EPA和PUFA。
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