牛传染性鼻气管炎（infection bovine rhinotracheities,IBR）是由牛传染性鼻气管炎病毒（infection bovine rhinotracheities virus,IBRV）所引起的一种呼吸道接触性传染病。IBRV感染牛后,临床症状主要为呼吸困难,同时还伴有发热、食欲不振、乳房炎、结膜炎、流产、生殖道炎症等。虽然IBR的病死率不高,但牛急性感染IBRV后,会造成免疫抑制,常继发感染其他细菌和病毒,从而加重病情,导致死亡率增加。gD蛋白作为IBRV的囊膜糖蛋白,在IBRV入侵宿主细胞过程起到重要作用,还可诱导机体产生强烈的体液和细胞免疫,产生保护性抗体,且针对gD制备的单克隆抗体具有中和活性,可中和病毒。因此,gD蛋白可作为开发诊断试剂、制备亚单位疫苗和抗病毒药物的候选靶蛋白,对于IBR的防治具有重要的研究意义。本研究为获得gD蛋白,根据Gen Bank公布的IBRV gD（登录号:NC＿001847.1）基因序列,利用TMHMM Server-2.0在线软件预测发现目的基因无跨膜区,用Signal P-4.1在线软件预测发现目的基因具有信号肽,根据pSecTag2A真核表达载体的多克隆酶切位点,在目的片段两侧加入合适的酶切位点,经CHO表达系统密码子偏好性优化后进行基因合成。将目的基因与真核表达载体进行酶切连接,成功构建pSecTag2A-gD重组真核质粒。将pSecTag2A-gD转染至CHO-K1细胞中,依次连续七天收取细胞上清,首先利用Western Blot检测His标签,确定在转染后48h具有最高的表达量,然后通过gD单抗检测目的蛋白的反应原性,最后利用镍柱亲和层析对gD蛋白进行纯化。结果如下:1.双酶切后琼脂糖凝胶电泳结果显示,已成功构建pSecTag2A-gD重组真核质粒。2.转染至CHO-K1细胞,收取细胞上清后,以抗His单抗为一抗,利用Western Blot成功检测到His标签;以gD单抗为一抗,Western Blot结果显示,目的蛋白与gD单抗能够结合,说明gD蛋白具有反应原性。3.利用镍柱亲和层析对gD蛋白进行纯化,成功纯化出目的蛋白,纯化蛋白浓度为62.95μg/m L。本研究表达的gD蛋白为IBRV后期检测方法的建立和疫苗研发奠定基础。