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1.目的:心肌肥厚的发生机制在体内需要多种生化反应的环节,其病理改变包括心室增厚、心脏间质纤维化及心肌细胞间胶原沉积等。其发生的重要环节是核内目的基因异常表达和细胞间的信号转导,原因主要是胞外异常刺激和体内环境的改变。在目前研究的信号转导通路中,丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)途径起到了至关重要的作用。体内肾素-血管紧张素系统(RAS)的激活是心肌肥厚形成的重要原因,其生物活性产物Ang II可通过激活p38MAPK信号转导通路导致心肌细胞肥大、心肌间质纤维化及心肌细胞凋亡。而Ang-(1-7)则可与Mas受体结合产生舒张血管平滑肌、减少血管生成、减少细胞增殖和间质纤维化等作用,能够减轻或逆转心室肥厚和重塑。然而,目前Ang-(1-7)的胞内信号转导机制尚不明确。本研究目的是通过Ang II诱导建立小鼠心肌肥厚模型,探讨Ang-(1-7)是否通过参与调控p38MAPK信号转导途径,从而抑制肥厚因子的生成、逆转心肌肥厚的发生。2.方法:2.1选用C57BL/6J雄性小鼠(8-10周龄),分为5组:Ang II组、Ang-(1-7)组、Ang II+KD组、Ang II+(1-7)组和假手术组,每组6只。提前将Ang II、Ang-(1-7)、Ang II+(1-7)分别注入渗透泵中(Ang II剂量为1.0ug/kg/min、Ang-(1-7)剂量为0.5ug/kg/min),然后把灌装好的渗透泵放入无菌生理盐水离心管中,37℃培养箱中孵化24小时。将小鼠颈背部皮肤剪刮出1cm×3cm大小横向区域后,碘伏消毒后剪开皮肤并游离,然后将装有试剂的渗透泵头端向内进行包埋,假手术组给予生理盐水,均处理4周。其中Ang II+KD组小鼠在安装Ang II渗透泵后,每天进行坎地沙坦(2.1mg/kg/天)灌胃,一日一次,每次灌胃液体量大约0.1-0.2ml。2.2小鼠在手术前及处死前分别称量体重和做心脏彩超,测量左室收缩末容积、左室舒张末容积、左室后壁和室间隔厚度、射血分数、左室缩短分数等数据。小鼠处死后摘取心脏计算心脏/体重质量比。Western blot检测心肌组织β-MHC、Bax、Bcl-2、p38及其磷酸化蛋白的表达情况。3.结果:3.1心脏/体重质量比:Ang II组高于其余四组,差异有统计学意义。Ang II+(1-7)组和Ang II+KD组较Ang(1-7)组和假手术组略高,无统计学差异。3.2心脏质量/胫骨长度比(心胫比):Ang II组均大于其余四组,有统计学差异;Ang II+(1-7)组和Ang II+KD组无统计学差异。3.3心脏超声:Ang II组在左室后壁和室间隔厚度、左室舒张末容积均高于其余四组,而左室缩短分数、左室射血分数(LVEF)低于其余四组。Ang II+(1-7)组和Ang II+KD组、Ang-(1-7)组及假手术组之间无统计学差异。3.4 Western Blot结果:Bax蛋白表达水平:Ang II组均明显高于其余四组,有统计学差异(P<0.05);Ang(1-7)组最低,与Ang II+(1-7)组相比有统计学差异(P<0.05);Ang II+(1-7)组与Ang II+KD组和假手术组相比无统计学差异(P>0.05)。Bcl-2蛋白表达水平:Ang II组均明显低于其余四组,有统计学差异(P<0.05);Ang-(1-7)组、Ang II+(1-7)组、Ang II+KD组和假手术组任意两组相比均无统计学差异(P>0.05)。Mas1蛋白表达水平:Ang II组最低,分别与Ang II+(1-7)组和Ang(1-7)组相比,均有统计学差异(P<0.05),与Ang II+KD组和假手术组相比无统计学差异(P>0.05)。Ang-(1-7)组与Ang II+(1-7)组相比,无统计学差异(P<0.05)。β-MHC蛋白表达水平:Ang II组最高,均明显高于其余四组,有统计学差异(P<0.05)。假手术组、Ang II+(1-7)组和Ang II+KD组三组相比,均无统计学差异(P>0.05)。P38及其磷酸化蛋白表达水平:各组之间总p38蛋白表达无统计学差异,而p38磷酸化蛋白(P-p38)表达水平Ang II组均高于其余四组,有统计学差异(P<0.05),其余四组之间无统计学差异。4.结论:4.1采用微型渗透泵持续持续皮下注射Ang II,建立小鼠心肌肥厚模型,其机制可能是通过Ang II持续刺激p38通路蛋白的磷酸化,激活了p38MAPK信号转导通路,导致心肌肥厚和心肌细胞凋亡的发生。4.2 Western Blot结果表明,Ang-(1-7)和坎地沙坦进行干预的小鼠在一定程度上逆转了心肌肥厚和心肌细胞凋亡,对心肌肥厚重构起到了保护作用,其机制可能为Ang-(1-7)抑制p38通路蛋白的磷酸化,表明Ang-(1-7)通过抑制p38MAPK信号传导通路的激活逆转心肌肥厚和心肌细胞凋亡的发生。