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第一部分家兔C型利钠肽基因真核表达载体的构建及鉴定目的为开展血管成形术后C型利钠肽基因的基因治疗,构建家兔C型利钠肽基因重组真核表达载体。方法通过RT-PCR的方法从家兔腹主动脉组织中克隆C型利钠肽基因,将CNP基因片段通过亚克隆至克隆载体pMD 18-T中,使用Pst Ⅰ单酶酶切后筛选出负向插入片段,再用Hind Ⅲ和Kpn I双酶切法将目的CNP片段定向克隆至真核表达质粒pEGFP-N1中,用双酶切法、序列测定等方法对重组真核表达质粒pEGFP-N1/rCNP进行鉴定。结果酶切及测序法鉴定都证实,家兔CNP基因被准确插入到pEGFP-N1酶切位点Hind Ⅲ和Kpn Ⅰ中。结论含家兔CNP基因的真核表达载体的成功构建和鉴定,为C型利钠肽基因治疗的研究奠定了基础。第二部分重组pEGFP-N1/rCNP质粒在人脐静脉内皮细胞中的表达目的真核表达载体pEGFP-N1/rCNP转染体外培养的人脐静脉内皮细胞,观察CNP基因在其中的表达。方法利用Lipofectamin TM 2000脂质体将重组质粒pEGFP-N1/rCNP转染人脐静脉内皮细胞。结果将重组质粒pEGFP-N1/rCNP转染人脐静脉内皮细胞,观察到目的基因CNP表达。结论家兔腹主动脉CNP基因的真核表达载体pEGFP-N1/rCNP可转染人脐静脉内皮细胞。第三部分局部转染C型利钠肽基因防治血管成形术后再狭窄的实验研究目的检测家兔CNP基因重组真核质粒pEGFP-N1/rCNP在家兔髂动脉成形术再狭窄模型中的表达及其对血管成形术后再狭窄的防治作用。方法将重组真核表达质粒pEGFP-N1/rCNP用腔内加压转染法在脂质体介导下转染家兔髂动脉成形术后再狭窄模型的髂动脉,以空白pEGFP-N1为阳性对照检测转染效率,分别用RT-PCR、病理学检测、蛋白质免疫印迹、荧光定量RT-PCR等方法检测重组真核表达质粒pEGFP-N1/rCNP在血管中的表达,观察各种病理学指标。结果重组真核表达质粒pEGFP-N1/rCNP在家兔髂动脉中可以高效表达,C型利钠肽基因mRNA及其蛋白的表达均明显增加,而空白pEGFP-N1组CNP表达明显降低。可观察到转染后血管内皮的修复增加,同时内膜增生的程度明显减轻,血管成形术后再狭窄率明显降低。结论重组CNP真核表达质粒pEGFP-N1/rCNP在家兔髂动脉血管成形术后再狭窄的模型中能够高效表达,CNP表达产物具有抑制血管成形术后局部血管再狭窄的作用,C型利钠肽的生理作用机制可能涉及抑制内膜增生,促进血管内皮修复等。