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诺如病毒(Norovirus，NoV)是1972年发现的一种病毒，近年被确定为导致不同年龄阶段人群急性病毒性腹泻的最主要病原之一，在所有非细菌性腹泻暴发中有60～80％的病例是由诺如病毒引起的。诺如病毒在环境中稳定存在，可以持续存在数天乃至数周。诺如病毒的主要衣壳蛋白VP1可以在体外自动组装形成病毒样颗粒，但作为较小结构蛋白的VP2，其对病毒粒子的功能尚不明确，研究VP2蛋白在病毒样颗粒稳定性的作用，具有重要的理论价值。在通过RT-PCR方法检测腹泻样本或牡蛎等贝类中的诺如病毒时，常常由于抑制物的存在，造成假阴性结果的产生，建立一种快速、简单的样本预处理方法，对于诺如病毒的检测具有重要应用价值。因此，本实验的主要研究内容与结果如下：
(1)利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统，分别构建了表达NoVVP1蛋白、VP2蛋白的重组杆状病毒AV-VP1与AV-VP2，通过间接免疫荧光与Westernblotting证实VP1与VP2在昆虫细胞sf9中获得成功表达；
(2)通过间接免疫荧光发现NoV VP2蛋白在sf9细胞中定位于细胞核，随后构建VP2蛋白与绿色荧光蛋白融合表达的真核表达质粒pEGFP-VP2，转染HeLa细胞，通过荧光显微镜观察，进一步确定了VP2在细胞中的定位形式；
(3)用AV-VP1感染sf9细胞，或用AV-VP1、AV-VP2共感染sf9细胞，获得了不含VP2蛋白的病毒样颗粒VLP，以及含有VP2蛋白的病毒样颗粒VLPs，利用透射电子显微镜观察到两种病毒样颗粒的存在，并通过CsCl密度梯度离心分离和纯化；
(4)将两种病毒样颗粒分别用pH2～8的磷酸盐缓冲液作用，通过圆二色谱仪分析两种病毒样颗粒的二级结构含量变化，结果表明，在pH2～7的条件下，两种病毒样颗粒的二级结构变化不明显；在pH8的条件下，VLP的α-螺旋含量下降27.3％，β-折叠的含量下降15.8％，无规卷曲的含量由升高37.5％；VLPs的α-螺旋含量下降9.1％，β-折叠的含量下降5.3％，无规卷曲的含量升高9.1％；VLPs二级结构的变化小于VLP的变化，说明VP2可以在一定程度上稳定VLP在碱性条件下的二级结构。
(5)将两种病毒样颗粒分别用浓度为0.2 mg/L、0.4 mg/L的臭氧水处理，通过圆二色谱仪分析两种病毒样颗粒的二级结构含量变化，结果表明，当用浓度为0.2 mg/L的臭氧水处理后，VLP的α-螺旋含量下降27.3％，β-折叠的含量下降21.1％，无规卷曲的含量升高46.8％；VLPs的α-螺旋含量下降9.1％，β-折叠的含量下降12.3％，无规卷曲的含量升高25％。
当用浓度为0.4 mg/L的臭氧水处理两种病毒样颗粒之后， VLP的α-螺旋含量下降45.5％，β-折叠的含量下降33.3％，无规卷曲的含量升高75％；VLPs的α-螺旋含量下降27.3％，β-折叠的含量下降26.3％，无规卷曲的含量升高56.3％。VLPs二级结构的变化小于VLP的变化，说明VP2可以在一定程度上稳定VLP在臭氧水中的二级结构。
(6)建立了单克隆抗体包被免疫磁珠结合RT-PCR富集、检测腹泻样本和牡蛎中诺如病毒的方法，并与多抗包被磁珠和传统的TRIzol法进行了比较，结果表明，当检测腹泻样本时，单抗结合RT-PCR法的灵敏度比多抗高102倍，比TRIzol法高103倍；当检测人工污染的牡蛎样本时，单抗结合RT-PCR法的灵敏度比多抗高10倍，比TRlzol法高102倍。
以上实验结果不仅有助于我们了解VP2蛋白的功能，揭示NoV在环境中稳定存在的分子机理，也为诺如病毒的富集与检测提供了新的方法。