霍乱弧菌蛋白质组研究中双向电泳技术平台的建立

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随着人类基因组研究计划的完成,生命科学的研究开始进入后基因组时代。蛋白质组学是在基因组学发展的基础上形成的新兴学科,主要是从整体水平研究细胞内蛋白质的组成及其活动规律,涉及对蛋白质特性、蛋白质翻译后修饰以及蛋白质与蛋白质之间的相互作用研究的广泛领域。目前,蛋白质组学的研究已经成为21世纪生命科学研究的热点领域之一。双向凝胶电泳一次可以分离成千上万个蛋白质,是蛋白质组学的主要分离技术。 本论文以霍乱弧菌N16961、JS32、D118、M045、93284等为实验菌株进行双向电泳平台的建立。实验中采用超声兼尿素、硫脲、CHAPS、DTT裂解法提取霍乱弧菌全菌蛋白,一向等电聚焦使用固相pH梯度凝胶条(pH4-7,6-11),胶内重泡胀技术,聚焦总电压时56kVh-66kVh.用DTT和碘乙酰胺两步平衡;二向电泳采用十二烷基磺酸钠一聚丙烯酰胺凝胶(12%,1.0mm);对凝胶进行考马斯亮蓝染色,用ImageScanner光密度扫描仪获取染色后的2-DE凝胶图谱。通过软件分析可以明显检测到超过700个蛋白点。且图谱都具有良好的重复性和分辨率。 本文成功地建立了霍乱弧菌蛋白质双向电泳技术,其蛋白质样品制备质量好,电泳分辨率高,完全适合于进一步的蛋白质组学研究。
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