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外源基因在宿主体内的表达水平是决定生物反应器能否产业化的关键。制约植物生物反应器应用的主要问题是外源蛋白在植物体内的累积水平低,生产成本高,没有市场竞争能力。要达到工业生产要求,理论上外源蛋白的表达量应达到植物可溶性蛋白的1%以上。
人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(hGM-CSF)是一种能够刺激粒细胞和巨噬细胞增殖、成熟和分化的糖蛋白,它是一种造血生长因子,能提高机体的免疫能力。主要用于治疗在骨髓移植、癌症化疗等过程中引起的白细胞减少病症。人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子在很多宿主细胞中得到表达,但用植物生产人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子时,表达水平很低,远未达到工业生产的要求。
本研究的主要目的是通过提高了表达水平的载体LBA4404::pCAMBIA3300-KD来转化大豆,使hGM-CSF在大豆中高效表达,进而得到高hGM-CSF表达水平的大豆新品系。构建人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(hGM-CSF)的植物高效表达载体pCAMBIA3300-CSF-KD,该因子末端被加上内质网驻留信号(KDEL),转化大豆合丰47。用大豆茎尖作为外植体,获得17株T1转化株,PCR扩增验证转基因植株,检测到11株阳性植株。为利用大豆作为生物反应器来生产人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子的研究打下基础。