Cyclin D1是cyclin家族中促细胞周期由G1期到S期的重要因子,被视作生长因子感受器。在G1期表达达到最高,具有周期依赖性,可激活CDK4或CDK6形成复合物,对细胞周期起正向调控作用。它的异常可导致细胞周期的紊乱,促进细胞大量增殖。P27kip是细胞周期素依赖性激酶抑制因子KIP家族的重要成员之一,可抑制多种cyclin/CDK复合物的活性,对细胞周期进行负调控。同时它也发挥着介导抑制性细胞因子反应,促进分化,增加细胞间粘附的作用。p27kip是多种肿瘤中独立的预后因子可作为临床诊断的标志。鉴于这两种基因的在肿瘤发生与抑制方面的重要,为了解犬乳腺肿瘤中cyclin D1与p27kip在基因与蛋白的过表达情况及相互关系,进一步了解这两种蛋白的生物学特性及其在临床诊断方面上的应用价值,本实验通过原核表达技术制备犬cyclin D1多克隆抗体,并本实验室已有p27kip抗体,作其在犬乳腺肿瘤细胞系CHMp、CHMm中及临床标本中的表达情况进行研究。结果1、在对两种细胞系中的两种基因检测结果显示,cyclin D1与p27kip的mRNA的含量在不同的细胞系中情况有差异。Cyclin D1在不同细胞系中的m RNA含量间有极显著性差异(p<0.01),且同正常乳腺的差异极显著(p<0.01);p27kip在两种细胞系中的m RNA无显著性差异,但同正常乳腺中的有极显著性差异(p<0.01);cyclin D1与p27kip在相同的细胞系中的m RNA的含量差异是极显著的(p<0.01)。2、cyclin D1抗体包涵体表达,在未活化包涵体的情况下成功制备犬cyclin D1抗体,通过检测该抗体拥有良好的反应原性,抗体效价较高(1:25600)。3、应用自备抗体检测两种细胞系的两种蛋白表达情况发现,Cyclin D1在不同细胞系中的蛋白表达含量有极显著性差异(p<0.01),且同正常乳腺的差异极显著(p<0.01);p27kip在两种细胞系中的蛋白表达有显著性差异(p<0.01),且同正常乳腺中的有极显著性差异(p<0.01);cyclin D1与p27kip在相同的细胞系中的蛋白表达的含量差异是极显著的(p<0.01)。4、对临床收集的84例犬乳腺肿瘤进行病理分类得到有良性肿瘤导管内癌浸润性导管癌浸润性小叶癌黏液癌髓样癌伴随淋巴细胞浸润混合样癌,通过免疫组化法对cyclin D1与p27kip蛋白表达情况结果分析出其阳性表达率。cyclin D1在两种肿瘤中的表达情况差异不具有统计学意义(p>0.005),但良性与恶性肿瘤与正常乳腺组织相比有显著性差异(p<0.01)。P27kip在肿瘤与正常组织比较差异具有统计学意义(p<0.05)。各类型肿瘤间的比较情况显示,cyclin D1在浸润性小叶癌与导管内癌肿瘤组织间差异有统计学意义(p<0.05),p27kip在混合样癌与导管内癌的差异有统计学意义(p<0.05)。cyclin D1与p27kip间存在相关性。结论尽管cyclin D1与p27kip的检测通过不同的方法其检测结果有差异,但均对犬乳腺肿瘤的诊断有指导意义;cyclin D1在早期肿瘤诊断中有参考价值,在区分导管内癌与浸润性小叶癌上有参考意义;cyclin D1与p27kip共同应用于浸润性导管癌的诊断方面有价值。