【摘 要】
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资源和环境问题是现代社会发展所面临的一个重要挑战。目前地球上每年光合作用的产物高达数亿吨,其中90%以上是纤维素类物质,但这部分资源却没有得到充分的开发利用。面临全
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资源和环境问题是现代社会发展所面临的一个重要挑战。目前地球上每年光合作用的产物高达数亿吨,其中90%以上是纤维素类物质,但这部分资源却没有得到充分的开发利用。面临全世界的粮食短缺、环境污染、能源危机等现实问题,将纤维素类物质转化为可再生资源成为缓解这些问题的一个重要手段。而纤维素酶的分子生物学与基因工程的研究发展将会加快纤维素广泛应用于工农业生产的进程,能切实提高纤维素的有效利用,通过利用纤维素酶将大量被浪费的纤维素资源转变为人类生活所需要的各类物质,从根本上解决全世界的危机。对纤维素酶分子的研究,对于有效利用纤维素,解决纤维素浪费或污染,提供生物能源有很大的应用和实用前景。内切葡聚糖苷酶(endoglucanase,简称EG)是纤维素复合酶中的一个重要组成部分,内切葡聚糖苷酶主要作用于纤维素内部的非结晶区,随即水解β-1,4-糖苷键,将长链纤维素分子截短,产生大量含非还原性末端的小分子纤维素。它在能源生物纤维素的有效利用方面占据着重要的作用。本研究的最终目的是通过对内切葡聚糖苷酶的改造,寻找纤维素的有效转化途径,有效利用大量被浪费的纤维素资源,将纤维素降解为人类可使用的资源。本论文从以下几方面开展工作,其结论如下:1.从绿色木霉菌中克隆出内切葡聚糖苷酶,序列全长为1257bp,编码氨基酸418个,利用RT-PCR,在内切葡聚糖苷酶中未发现内含子。2.通过在EGII基因3’端添加内质网滞留信号(KDEL序列),构建了p3300-35S-EGⅡ-Tnos载体。3.通过农杆菌介导方法侵染烟草,获得转基因烟草33株。
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