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目的:1.分析免疫耐受期慢性乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)感染者肝内调节性T细胞(Regulatory T cell,Treg)水平,探讨Treg细胞是否是导致慢性HBV感染者长期处于免疫耐受状态的关键因素,以期能够为将来打破免疫耐受状态提供理论基础。2.分析免疫清除期慢性HBV感染者入院2W时外周血HBsAg、HBeAg和HBVDNA下降幅度与肝内Treg和Th17细胞水平之间的关系,探讨肝内Treg和Th17细胞水平对机体通过自身的细胞免疫反应清除体内HBV能力的影响,为提高机体自身清除HBV的能力提供理论参考。3.分析不同炎症和纤维化程度的免疫清除期慢性HBV感染者肝内Treg/Th17平衡变化,探讨其平衡变化对病情进展的影响,以期可以为将来通过改变体内Treg/Th17平衡状态降低患者进展为肝衰竭或肝硬化的风险提供理论基础。方法:纳入我院68例行肝组织活检的慢性HBV感染者,其中20例处于免疫耐受期,36例处于免疫清除期,12例处于非活动期。免疫组织化学法检测肝内Foxp3+Treg细胞和IL-17+Th17细胞,应用电化学发光免疫分析法(Electro chemiluminescence immunoassay,ECLIA)检测外周血HBsAg、HBe Ag水平,应用实时定量PCR法检测外周血HBV DNA水平。以8例健康供肝者为对照组。比较各期慢性HBV感染者和健康对照组肝内Treg/Th17平衡的变化,分析免疫清除期慢性HBV感染者入院2W时外周血HBsAg、HBeAg和HBVDNA下降幅度与肝内Treg和Th17细胞水平之间关系,观察不同炎症和纤维化程度的免疫清除期慢性HBV感染者肝内Treg/Th17平衡变化,分析其与肝脏损伤程度的关系。结果:1.与健康对照组相比,免疫耐受期组和非活动期组肝内Treg细胞水平虽有所升高[分别为(1.13±0.21)cells/hpf、(2.44±0.65)cells/hpf、(3.37±1.02)cells/hpf],但差异无统计学意义(P>0.05);免疫清除期组肝内Treg细胞水平[(13.90±5.12)cells/hpf]较其他三组均明显升高,差异有统计学意义(均P<0.01)。而免疫耐受期组和非活动期组之间比较差异无统计学意义(p>0.05)。而且炎症程度分级(g)及纤维化程度分期(s)不同的免疫清除期患者肝内treg细胞水平存在显著差异:g4组>g3组>g2组[分别为(22.08±0.66)cells/hpf、(16.90±1.47)cells/hpf、(9.85±2.79)cells/hpf],差异有统计学意义(均p<0.001);s3组>s2组>s1组[分别为(21.77±0.97)cells/hpf、(14.64±2.66)cells/hpf、(7.70±1.20)cells/hpf],差异有统计学意义(均p<0.001)。2.免疫清除期患者入院2w时外周血hbsag、hbeag和hbvdna下降幅度与肝内treg细胞水平呈显著负相关(均p<0.001),而与th17细胞水平及treg/th17比值均无相关性(均p>0.05)。3.与健康对照组相比,免疫耐受期组肝内th17细胞水平虽有所升高,但差异无统计学意义(p>0.05);免疫清除期组和非活动期组肝内th17细胞水平显著升高,差异有统计学意义(均p<0.05)[分别为(1.08±0.18)cells/hpf、(1.98±0.55)cells/hpf、(17.37±1.52)cells/hpf、(3.82±0.67)cells/hpf];与免疫耐受期组相比,免疫清除期组和非活动期组肝内th17细胞水平显著升高,差异有统计学意义(p<0.001)。免疫清除期组较非活动期组肝内th17细胞水平显著升高,差异有统计学意义(p<0.001)。而且炎症程度分级(g)及纤维化程度分期(s)不同的免疫清除期患者肝内th17细胞水平存在显著差异:g4组>g3组>g2组[分别为(20.12±0.54)cells/hpf、(17.50±1.13)cells/hpf、(16.56±0.92)cells/hpf],差异有统计学意义(均p<0.05);s3组>s2组>s1组[分别为(20.03±0.53)cells/hpf、(17.21±0.80)cells/hpf、(16.08±0.93)cells/hpf],差异有统计学意义(均p<0.001)。4.与健康对照组相比,免疫耐受期组肝内treg/th17比值稍有升高,但差异无统计学意义(p>0.05);免疫清除期和非活动期组肝内treg/th17比值降低,前者差异有统计学意义(p<0.05),后者差异无统计学意义(p>0.05)[分别为(1.06±0.18)、(1.31±0.50)、(0.79±0.24)、(0.88±0.20)]。与免疫耐受期组相比,免疫清除期组和非活动期组肝内treg/th17比值明显降低,差异有统计学意义(均p<0.01);免疫清除期组和非活动期组之间差异无统计学意义(p>0.05)。炎症程度分级(g)及纤维化程度分期(s)不同的免疫清除期患者肝内treg/th17比值存在显著差异:g4组>g3组>g2组[分别为(1.10±0.02)、(0.97±0.39)、(0.59±0.15),差异有统计学意义(均p<0.05);s3组>s2组>s1组[分别为(1.09±0.03)、(0.85±0.15)、(0.48±0.05)],差异有统计学意义(均p<0.001)。结论:1.与健康对照组比较,免疫耐受期患者肝内Treg和Th17细胞水平及其平衡状态均未见明显变化,提示慢性HBV感染者长期的免疫耐受状态并不是由肝内Treg细胞大量聚集或者Treg/Th17失衡造成的。所以有关慢性HBV感染者免疫耐受形成的机制还有待进一步研究。2.免疫清除期患者肝内Treg细胞明显升高,而且炎症和纤维化程度越严重,肝内Treg细胞升高越明显,提示免疫清除期患者肝内高水平的Treg细胞有可能通过抑制机体过强的免疫反应来保护宿主,避免因过强的免疫反应造成严重病理损害;此外,患者入院2W时外周血HBsAg、HBeAg和HBV DNA下降幅度与肝内Treg细胞水平呈负相关,提示免疫清除期患者肝内高水平的Treg细胞可能会限制机体通过自身免疫反应自发地清除体内HBV的能力,进而影响机体内HBV的清除。因此,在控制过强的免疫反应对机体造成严重损伤的前提下,适当降低免疫清除期患者肝内Treg细胞水平或功能可能会有利于促进机体对HBV的清除。3.免疫清除期患者肝内Th17细胞明显升高,而且炎症和纤维化程度越严重,肝内Th17细胞升高越明显,提示Th17细胞可能介导了慢性HBV感染者肝脏的免疫损伤过程,而且可能还参与了肝纤维化的形成过程。4.不同炎症和纤维化程度的免疫清除期患者肝内Treg/Th17比值存在明显差异,炎症和纤维化程度越严重的患者肝内Treg/Th17比值越高,提示当肝组织损伤程度较轻时,肝内以介导免疫损伤的Th17细胞升高为主,而当肝组织严重损伤时,Treg细胞逐渐占据主导地位以抑制机体过强的免疫反应,避免病情进展为肝衰竭或肝硬化。因此,当肝脏因过强的免疫反应受到重度损伤时,可以尝试通过一些免疫调节剂改变Treg/Th17平衡,降低患者进展为肝衰竭或肝硬化的风险。