产油微藻的筛选与评价、高产油策略及其差异性研究

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产油微藻是生物柴油生产的理想原料,随着能源危机的加剧,它逐渐成为各国政府和藻类学家关注的焦点。实现微藻生物柴油产业化的关键在于如何提高油脂产量,受藻种性能和培养条件所限,许多已开展的研究工作并不具备实际指导意义,而且对于“天然产油微藻(非模式微藻)”生理生化特性的研究也较少,而这些研究工作正是解决理论瓶颈、提高油脂产量的关键。本论文主要开展了“产油微藻的筛选”、“光强、初始氮供应量和氮源形式三种策略提高微藻油脂产量的可行性”、“两株不同类型天然产油微藻生理生化特性及其差异性研究”、“产油小球藻脂类积累过程中的生长、碳流分配以及光合特性研究”、“产油微藻扩大培养的产能评价”等五个方面的研究工作,主要研究结果如下:1.对实验室保藏的20株微藻进行了评价(真眼点藻纲2株,硅藻纲1株,绿藻门17株),根据生物质浓度、总脂含量、β-胡萝卜素含量以及总脂收获量等参数的高低,筛选出6株总脂收获量超过2.0gL-1的微藻,它们是韦氏真眼点藻(Eustigamatos vischeri)、荒漠栅藻(Scenedesmus deserticola)、麻织绿球藻(Chlorococcum tatrense)、眼点拟微绿球藻(Nannochloropsis oculata)、椭圆绿球藻(Chlorococcum ellipsoideum)和雪绿球藻(Chlorococcum nivale),经“生物柴油质量预测模型”的验证,6种微藻生物柴油的质量均符合中国(BD100)、美国(ASTM6751)和欧盟(EN14214)的标准;在6株潜力微藻中,韦氏真眼点藻(E.vischeri)的总脂收获量可达4.0gL-1,同时该藻还可以积累2.39%DW的β-胡萝卜素,具有极高的开发利用价值。2.通过测定生物质浓度、总脂含量和中性脂含量,探索了“光强”、“初始氮供应量”、“氮源形式”三种策略,对6株产油微藻生长和中性脂积累的影响,结果表明:三种策略均可以提高6株产油微藻的中性脂产量,但存在明显的种间差异和因素交叉影响;6株产油微藻优化后的中性脂产量分别为:韦氏真眼点藻(4.9gL-1,高光强+尿素+低氮供应)、荒漠栅藻(4.1gL-1,高光强+硝酸钠+高氮供应)、椭圆绿球藻(3.8gL-1,高光强+尿素+低氮供应)、眼点拟微绿球藻(3.0gL-1,高光强+硝酸钠+高氮供应)、雪绿球藻(2.7gL-1,高光强+硝酸钠+低氮供应)、麻织绿球藻(2.7gL-1,高光强+硝酸钠+高氮供应)。根据产油微藻对起始氮供应量的响应规律,将产油微藻分为3种类型:类型-I,低氮供应降低了生物质浓度而提高了中性脂含量;类型-II,低氮供应同时降低生物质浓度和中性脂含量;类型-III,低氮供应同时提高了生物质浓度和中性脂含量,类型-III更具产业化价值。3.本论文研究了3.5mM、5.9mM、8.8mM和17.6mM四种初始氮浓度条件下,两株不同类型的天然产油微藻––荒漠栅藻S.deserticola(类型I)和韦氏真眼点藻E.vischeri(类型III),在细胞生长、生化组成、氮吸收利用、光合作用及呼吸作用等方面的变化规律及差异性,主要研究结果为:(1)生长特性:有利于两株微藻细胞分裂的氮浓度均为8.8mM,而有利于两株微藻生物质积累的氮浓度为17.6mM(荒漠栅藻)和5.9mM(韦氏真眼点藻);随初始氮供应量的降低,荒漠栅藻的单位细胞重量降低,而韦氏真眼点藻的单位细胞重量增加;(2)氮的吸收利用:两株微藻具有相似的NO3-的吸收规律,但韦氏真眼点藻具有比荒漠栅藻更高蛋白质合成速率和合成量;(3)生化组成:培养过程中,两株微藻均表现出“碳水化合物和蛋白质含量降低、总脂含量升高”的趋势;高浓度氮供应有利于两株微藻蛋白质的合成,而低浓度氮供应有利于碳水化合物和脂类的合成;荒漠栅藻中性脂的积累速率和积累量显著高于韦氏真眼点藻,而韦氏真眼点藻的碳水化合物含量高于荒漠栅藻;荒漠栅藻在培养中后期大量积累角黄素,其积累量与氮浓度呈负相关,韦氏真眼点藻在培养中后期大量积累β-胡萝卜素,其积累量与氮浓度呈正相关;两株微藻其余光合色素的含量在培养过程中均显降低趋势,降低幅度与初始氮供应量呈负相关;(4)光合作用和呼吸作用:培养过程中,两株微藻的光合效率(Fv/Fm,rETR和Pn)和呼吸速率均呈现降低趋势,韦氏真眼点藻具有较低的热耗散效率和高的光能利用效率。4.以分离自广东某热带湖泊的产油微藻JNU13为实验材料,通过18SrRNA基因序列分析和形态学观察,初步确定该藻株为普通小球藻JNU13(Chlorella vulgarisJNU13),研究了该藻在脂类积累过程中的细胞生长、碳流分配及光合特性,(1)生长与脂类积累:培养前期,普通小球藻JNU13的细胞分裂与胞内脂类积累可以同步进行,培养中后期,细胞分裂停止,胞内脂类积累成为生物量浓度增加的主要原因;(2)碳流分配:培养前期,普通小球藻JNU13固定的碳主要用于碳水化合物的合成,培养中后期,主要用于脂类的合成;(3)光合特性:光合效率的降低对普通小球藻JNU13脂类积累存在反馈抑制作用,脂类积累过程中伴随光系统能量分配的改变,光系统I能量比例降低,光系统II能量比例相对稳定,与氧气释放相关的Z型电子传递链活性降低,可变电子传递链可以为产油微藻JNU13的生长提供能量,高光合效率使高氮供给组获得了比低氮供给组更高的总脂含量。5.利用体积为24L的室内平板式光生物反应器(光径为4.0cm),对荒漠栅藻(S.deserticola)和眼点拟微绿球藻(N.oculata)进行了扩大培养及产能评价,结果表明:两株微藻在平板式光生物反应器中生物质浓度、总脂含量以及总脂收获量均显著低于0.3L柱式光生物反应器(光径3.0cm)的培养结果;荒漠栅藻和眼点拟微绿球藻的单位面积生物质产率分别为16.43gm2day-1和17.08gm2day-1,总脂产率为7.64gm2day-1和5.48gm2day-1;荒漠栅藻藻粉成本为1868.2元/千克,眼点拟微绿球藻藻粉成本为1949.9元/千克,室内培养条件下,高通气搅拌成本和光照成本是藻粉成本过高的主要原因。
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