独脚金内酯(SLs)是一类具有倍半萜内酯结构特征的植物信号分子,已被确定为一种新型的植物激素。研究发现,SLs具有调控植物种子萌发,光形态发生,叶片衰老以及根枝构型等生理功能。SLs的生物合成、信号传导和代谢路径也成了近年来生物学家的关注热点。然而,由于SLs在植物体内含量很低、且植物基质非常复杂,制约了 SLs研究的深入和研究进度。此外,SLs的性质不稳定,对外界条件敏感,因此建立灵敏稳定的SLs定量分析方法,对于研究SLs分子作用机制是十分重要的。随着新的分析仪器不断开发,质谱的普及,LC-MS已逐渐成为SLs最主要的分析工具。尽管如此,SLs分析仍然受到植物组织基质复杂,且内源性SLs的含量极低,电喷雾质谱离子化效率低等因素的影响。因此在分析检测之前,样品前处理步骤至关重要。目前,液液萃取、固相萃取、HPLC纯化已经被用于植物根、茎样品的前处理过程。这些方法虽然可行,但大多数已报道的方法存在过程耗时、消耗大量有机溶剂、萃取回收率较低等缺点。因此,SLs样品前处理技术的选择性、检测灵敏度、分析通量等方面有待改进。本文致力于开发快速、灵敏、高通量、高选择性的SLs的LC-MS/MS分析方法。1.为了去除植物组织中的色素和极性较强的基质,采用固相萃取的方法富集纯化水稻提取液中的SLs,建立了植物根组织中内源性独脚金内酯的LC-MS/MS分析方法。提出了双层固相萃取(GCB/MAX+MCX)串联LC-MS/MS的方法,该方法简便、快速,可有效去除植物提取液中的色素以及极性基质,适用于1 g水稻根样品中SLs的准确定量分析。2.在第一个工作的基础上,首次提出了用-SH衍生SLs的方法,采用2-MP作为衍生化试剂,衍生后样品再经过MCX固相萃取小柱,提高了样品前处理的选择性,建立了固相萃取与化学衍生技术结合的前处理方法,除杂效果好,方法灵敏度高。利用所开发的方法实现了对1g缺磷和正常培养的水稻根中3种内源性独脚金内酯的定性和定量分析。