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目的：p53正向细胞凋亡调控因子(p53upregulated modulator of apoptos is, PUMA)是Bcl-2家族唯BH3结构域亚家族成员,位于线粒体内,正常情况下表达很低,可被多种损伤因素如射线、病毒、化疗药物等诱导激活。PUMA通过其特有的BH3结构域与Bcl-2或Bcl-xL等抗凋亡蛋白结合后抑制其抗凋亡作用。PUMA抑制剂模拟BH3结构域与抗凋亡蛋白结合,阻碍PUMA与Bcl-2样蛋白结合,凋亡被抑制。我们想观察PUMA在两种不同的模型下表达情况以及PUMA抑制剂能否对细胞或组织起到保护作用。方法：(1)选取怀孕13.5天的ICR小鼠,提取小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryo fibroblast, MEFs)(2)用不同浓度阿霉素(Doxorubicin, DOX)刺激MEFs观察PUMA表达及细胞损伤情况,并用PUMA抑制剂观察对细胞的保护作用。(3)用C57BL/6小鼠建立缺血-再灌注模型,分为假手术组、手术组和PUMA抑制剂组。(4)采取不同缺血和再灌注时间观察血清ALT水平,做Western Blot检测PUMA蛋白水平表达,做反转录-实时定量PCR检测PUMA mRNA水平表达,做肝脏H&E切片看损伤情况,TUNEL染色看肝脏细胞凋亡情况。结果：当阿霉素浓度在0.5-5mg/L时,可以刺激MEFs PUMA表达升高,加药浓度再升高PUMA表达反而降低；用1μMPUMA抑制剂可以抑制阿霉素低浓度刺激的PUMA表达,且能保护MEFs抵抗阿霉素导致的损伤。对于小鼠缺血-再灌注损伤模型,根据缺血、再灌注时间不同,损伤情况各异。当缺血时间为60分钟,再灌注1小时,肝脏损伤较轻,PUMA表达升高,PUMA抑制剂可保护肝脏抵抗损伤；当缺血时间长至90分钟,再灌注一小时,肝脏损伤较严重时,PUMA表达升高不明显,PUMA抑制剂无法起到保护作用。结论：PUMA在一定损伤范围内可被诱导激活,此时凋亡是主要损伤途径,应用PUMA抑制剂可以降低PUMA蛋白水平和转录水平表达,细胞凋亡被抑制,保护细胞或组织抵抗损伤。当刺激因素过强,凋亡不是损伤的主要表现途径,PUMA表达升高不明显。PUMA抑制剂在体内体外均可发挥作用,说明其应用可能会很广泛。我们今后将会用PUMA KO小鼠验证我们的结果并建立肝脏冷缺血-再灌注模型或器官移植模型观察PUMA缺失或被抑制后能否对器官产生保护作。