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蜂王浆(royal jelly)是蜜蜂哺育工蜂头部王浆腺分泌的乳状物,是1-3日龄工蜂幼虫及蜂王终身所食用的食料,具有抗疲劳、预防肿瘤、免疫调节等多种营养保健功能和生理活性。蜂王浆的神奇功效与它所含有的活性成分密不可分,其中蛋白质是重要的营养成分,蛋白质中的可溶性蛋白又称为王浆主蛋白MRJPs(major royal jelly proteins),国内外研究已部分证实MRJPs可能是蜂王浆中的重要营养及生理调节因子。本研究首先利用生物酶解技术,通过对pH、水解时间和酶浓度等酶解工艺条件的优化,得到王浆蛋白水解的最佳条件：37℃下王浆水溶性蛋白,先后用1%(W/W)的胃蛋白酶在pH=2.0和胰蛋白酶在pH=7.5的条件下水解4 h。在上述条件下水解得到王浆蛋白水解产物(H-MRJPs)的水解度为28.7%,总氮回收率为35.5%。利用超滤技术对H-MRJPs进行初步分离纯化,活性测定发现分子量小于1 kDa的肽组分是H-MRJPs中起抗氧化作用和降压作用的主要物质,其抑制血管紧张素转化酶(ACE)的半抑制浓度(IC50)达到0.67mg pro/mL。其次,本研究构建了pPIC 9K-AccMRJP5重组穿梭载体,将pPIC 9K-AccMRJP5线性化,电转化到毕赤酵母GS115 (Pichia pastoris GS115)中。采用添加G418抗生素的培养基,对重组酵母多拷贝表达菌株筛选,得到6个阳性高表达菌株。对高表达菌株进行甲醇诱导表达,表达产物SDS-PAGE电泳分析,发现在100 kDa处出现特异性条带；采用GST-AccMRJP1多克隆抗体进行Western blot分析,显示特异性免疫印迹,表明AccMRJP5基因在酵母菌中表达成功。对重组表达的AccMRJP5作去糖基化酶处理和处理产物SDS-PAGE分析,显示分子量由100 kDa降低到69 kDa,表明表达产物属于糖基化蛋白。对AccMRJP5表达产物进行亲和层析纯化,得到了纯化蛋白。对AccMRJP5表达产物进行细胞培养实验,证实可促进家蚕细胞Bm-17生长,可部分替代牛血清,具有重要的应用前景。本研究利用生物酶解和超滤分离技术以MRJPs为原料成功制备得到了具有抗氧化和体外降压活性的生物活性肽。构建了AccMRJP5真核表达载体并实现其在毕赤酵母中的表达,同时研究了其对细胞的生物活性,为蜂产品尤其是蜂王浆高科技产品的开发奠定了基础。