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补体系统由广泛存在于血清、组织液和细胞膜表面的30多种可溶性蛋白和膜结合蛋白组成,补体系统是天然免疫的重要组成部分,不仅参与炎症反应还能够提高适应性免疫应答。补体系统可以快速识别病原微生物并通过免疫效应细胞的调理吞噬作用和杀伤作用清除病原体,但病原微生物也进化出多种机制逃逸补体系统的攻击,即补体逃逸。猪链球菌(Streptococcus suis)是一种重要的人兽共患病原菌,有33种血清型,其中2型(SS2)流行最广,致病性最强,可以逃逸补体的杀伤而在动物血液或组织中存活较长时间,但补体逃逸机制尚不清楚。补体C3a和C5a是重要的趋化因子,在炎症和调理吞噬作用中发挥重要作用。本研究分别以它们的受体C3aR和C5aR为诱饵,筛选出多个能够与C3aR和C5aR结合的SS2的分泌蛋白和膜蛋白,其中SS2的毒力因子溶血素(Suilysin,SLY)能与C3aR和C5aR互作。进一步研究发现SLY能够竞争性抑制C3a和C5a与其受体的结合,从而抑制趋化作用。主要研究结果如下:1.C3aR和C5aR结合蛋白的筛选:以C3aR和C5aR为诱饵,通过细菌双杂交实验筛选出多个能够与C3aR和C5aR结合的SS2的分泌蛋白和膜蛋白,其中SS2的毒力因子溶血素(Suilysin,SLY)能与C3aR和C5aR互作。2.C3aR、C5aR与SLY相互作用的验证:通过Far westen blot的方法对SLY与C3aR、C5aR之间的相互作用进行了验证。3.C3aR、C5aR与SLY互作结构域的鉴定:通过ELISA鉴定出C3aR的第二个胞外环(C3aR e2)与SLY之间有相互作用,而C3aR_e2是C3a结合C3aR的主要片段。4.重组蛋白SLY对趋化作用的影响:人类急性单核白血病细胞(THP-1)作为C3a与C5a趋化的对象,首先通过流式细胞术确定了 C3a受体与C5a受体在THP-1细胞表面表达,之后用不同浓度的SLY与细胞孵育后观察细胞数目,发现1μM以下的SLY并不会使细胞数目产生变化,可以确保趋化结果的有效性,而随SLY浓度的增加,C3a与C5a的趋化能力降低。这说明SLY对C3a与C5a的趋化具有抑制作用。5.SLY突变株对趋化作用的影响:通过野生株与SLY突变菌株生长曲线的比较,发现sly基因缺失后,对细菌的生长无明显影响。故将野生株与突变株上清液孵育THP-1细胞,再用趋化因子C3a、C5a做趋化实验。结果发现,猪链球菌的上清蛋白并不会使细胞数目产生变化,可以确保趋化结果的有效性,SLY突变株与野生株相对比,由于SLY突变株不分泌SLY蛋白,因此SLY突变株对趋化的抑制作用明显减弱。