染料木素对肾缺血损伤的作用及机制的研究

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目的:缺血再灌注损伤是临床上一种复杂的病理生理过程,是急性肾损伤(AKI)的主要病因,在临床上具有高发病率和致死率。染料木素是从豆科植物中提取出来的活性成分,具有广泛的生物化学和药理活性,在脑、小肠缺血再灌注损伤中的保护作用已得到证实。但目前染料木素在肾脏缺血再灌注损伤中的保护作用尚未得到证实。SIRT1,是 NAD+依赖的去乙酰化酶,已有研究证实 SIRT1在肾脏疾病中的保护作用。本实验旨在通过小鼠肾脏缺血再灌注损伤模型探讨染料木素对肾脏缺血再灌注损伤的保护作用及其可能的机制。  方法:(1)将小鼠随机分为5组:假手术组(Sham)、模型组(I/R)、染料木素低剂量组(G5)、染料木素中剂量组(G10)、染料木素高剂量组(G15)。染料木素预处理组在手术操作前30分钟尾静脉染料木素(染料木素溶于2%DMSO),剂量分别为5 mg/kg、10 mg/kg和15 mg/kg。用血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)来检测小鼠肾功能改善情况,用HE和TUNEL检测小鼠肾小管损伤程度和肾脏组织中凋亡细胞的表达情况, PCR法检测小鼠肾脏组织中SIRT1表达, Western blotting检测SIRT1,Cleaved caspase-3的表达,同时用IHC检测SIRT1,PCNA的表达,  (2)将小鼠随机分为4组:模型组(Vehicle)、对照组(sirtinol)、染料木素高剂量组(G15)、抑制剂组(G15+sirtinol)。用血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)来检测小鼠肾功能,用HE和TUNEL法检测小鼠肾小管损伤程度和肾脏组织中凋亡细胞的表达情况,同时用IHC检测小鼠肾脏组织中PCNA的表达,  (3)将小鼠随机分为4组:模型组(LV-Control)、对照组(LV-shSIRT1)、染料木素高剂量组(G15)、SIRT1低表达组(G15+LV-shSIRT1)。用血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)检测小鼠肾功能,用HE和TUNEL法检测小鼠肾小管损伤程度和肾脏组织中凋亡细胞的表达情况。Western blotting法检测小鼠肾脏组织中p53,ac-p53,p21, PCNA的表达。同时,用IHC检测小鼠肾脏组织中SIRT1,PCNA的表达。  结果:(1)不同浓度染料木素(5,10,15 mg/kg)处理缺血再灌注小鼠,小鼠肾功能得到改善。同时,染料木素处理后SIRT1蛋白表达逐渐升高且呈剂量依赖性。此外,染料木素处理后能明显降低小鼠肾脏细胞的凋亡,促进细胞的增殖;(2)SIRT1抑制剂能明显降低小鼠肾脏PCNA表达,促进细胞凋亡;(3)慢病毒介导的SIRT1低表达加剧小鼠肾功能损伤,p53,ac-p53,p21蛋白表达增高,PCNA表达明显降低。  结论:(1)染料木素对小鼠肾缺血再灌注损伤具有保护作用,能显著改善肾功能,降低肾小管坏死的程;(2)染料木素对小鼠缺血再灌注的保护,与SIRT1的表达,肾细胞的凋亡、增殖密切相关;(3)抑制SIRT1的表达,能逆转染料木素对小鼠缺血再灌注的保护作用。
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