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酒精性肝损伤(Alcoholic liver injury,ALI)是由于长期大量饮酒(嗜酒)所致的肝脏相关疾病,这些疾病包括脂肪性肝炎、酒精性纤维化、肝硬化和肝细胞癌,在中国由于饮酒导致肝脏疾病的发生率和死亡率近年来呈明显上升趋势。ALI的发病机制有几种,主要包括由酒精及内毒素引起的肝枯否细胞(kupffer cells,KCs)活化及肝细胞凋亡等原因引起,因此抑制KCs活化及肝细胞凋亡能够有效减缓酒精性肝损伤进展。KCs为肝脏固有巨噬细胞,具有吞噬、免疫调节及分泌炎症因子等功能,其活化在酒精性肝损伤中具有重要作用,持续的炎症状态能够破坏肝脏正常功能与结构,从而进展为更严重的肝脏病理状态。蛋白酪氨酸磷酸酶(PTPs)属于一个超家族,它可以将其蛋白底物上酪氨酸去磷酸化,在许多生物过程中发挥关键作用。蛋白酪氨酸磷酸酶1B(Protein tyrosine phosphatase 1B,PTP1B)是一种细胞内PTPs,参与许多细胞信号分子的调节,其在肝再生、肝细胞凋亡和肝癌中具有多种调节作用,但其在ALI中的作用尚未完全阐明。本文将着力探究PTP1B在酒精性肝损伤中巨噬细胞活化过程的功能及NF-κB信号通路在此过程中的作用机制。本次研究采用体内实验和体外实验相结合的方法。体内实验:8-10周的C57小鼠随机分为两组(正常组和模型组)饲养在动物实验中心,采用NIAAA实验方法进行造模,经过15天的对照及酒精饲料喂养,然后麻醉取血及肝组织及原代肝Kupffer细胞。血清采用ELISA及其他试剂盒检测炎症因子和相关肝脏损伤指标的水平变化,肝组织经过处理进行HE、免疫组化、荧光等组织学实验,肝组织及原代肝Kupffer细胞提取后进行WB及QPCR等相关检测。体外实验:采用酒精及LPS分别刺激小鼠巨噬细胞RAW264.7,然后转染si RNA和p EX3-PTP1B;而小鼠肝细胞AML-12使用适应浓度酒精刺激,然后两者分别经过24h的适宜培养后,提取蛋白及总RNA,WB实验检测PTP1B及炎症因子的蛋白表达,QPCR实验检测PTP1B及炎症因子的基因水平表达。采用相应试剂盒提取核蛋白检测NF-κB相关P65及磷酸化P65水平的表达,ELISA试剂盒检测细胞培养上清中炎症因子的相应水平。结果:组织学染色和血清学实验证实动物模型建立成功,体内实验我们发现PTP1B的基因及蛋白表达水平上调,炎症因子如IL-1β、IL-6和TNF-α的血清及肝组织水平表达上升。体外实验发现AML-12细胞经过酒精刺激后PTP1B的基因及蛋白表达水平无明显改变;而小鼠RAW264.7细胞经过活化后PTP1B的基因及蛋白表达水平明显升高。另外RAW264.7细胞过表达PTP1B基因后细胞核内磷酸化P65蛋白的表达量增加,并且炎症因子的表达水平上调,而沉默PTP1B后核内磷酸化P65蛋白的表达量减少,炎症因子的表达水平下调。表明沉默或过表达PTP1B能够调节NF-κB信号通路的激活或抑制,并影响其下游炎症信号通路的传递。结论:在酒精性肝损伤模型中PTP1B的基因及蛋白表达水平上调,沉默及过表达PTP1B能够调节炎症因子如IL-1β、IL-6和TNF-α的水平表达,同时能够调控NF-κB通路蛋白的表达,表明PTP1B可能通过调控NF-κB信号通路从而调节酒精性肝损伤中巨噬细胞的活化状态及炎症因子的表达水平。